[發明專利]一種添加檸檬酸鈉促進銅綠假單胞菌降解芘的方法及其應用

有效

• 申請號: 201811285102.7
• 申請日: 2018-10-31
• 公開（公告）號: CN109402001B
• 公開（公告）日: 2021-10-19
• 發明（設計）人: 李靜;鄧毛程;栗瑞敏;陳聶欣;王瑤;吳豐裕;張慧
• 申請（專利權）人: 廣東輕工職業技術學院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;B09C1/10;C02F3/34;C02F101/34;C12R1/385
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 蘇運貞

本發明公開了一種添加檸檬酸鈉促進銅綠假單胞菌降解芘的方法及其應用。本發明是在存在芘的環境中加入檸檬酸鈉和銅綠假單胞菌，通過檸檬酸鈉促進銅綠假單胞菌降解芘。本發明發明人發現，檸檬酸鈉是銅綠假單胞菌的容易利用碳源，可促進菌體生長，在芘降解前期可迅速形成較大菌體量；當檸檬酸鈉被利用后，會使培養基pH上升，可以抵消其它物質分解代謝引起pH下降，從而有利于銅綠假單胞菌的生長和對芘的代謝；且其發酵液對疏水性化合物的乳化效果更好，有利于芘的溶解及被降解。因此，本發明適合在環境中降解芘，修復環境。

技術領域

本發明屬于環境生物技術領域，特別涉及一種添加檸檬酸鈉促進銅綠假單胞菌降解芘的方法及其應用。

背景技術

芘是具有四個苯環的高分子量多環芳烴，具有穩定、難降解、致癌、致畸、致突變等特性，對人類健康和生態環境造成了巨大危害被美國環保局(US EPA)列為優先監測物。多環芳烴的生物降解吸引國內外研究者高度關注，芘通常被作為高分子量多環芳烴降解研究的模式化合物。迄今為止，現已經發現多種微生物能夠降解芘，主要包括紅球菌屬(Rhodococcus)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、寡養單胞菌屬(Stenotrophomonas)、鞘氨醇單胞菌屬(Sphingomonas)、分支桿菌屬(Mycobacteria)、伯克氏菌屬(Burkholderia)、產堿性桿菌屬(Alcaligenes)、曲霉屬(Aspergillus)、短梗蠕孢屬(Trichocladium canadense)、青霉菌屬(Penicillium janthinellum)、尖孢鐮刀菌屬(Fusarium oxysporum)等。但是，由于芘不溶于水，在環境中很難被微生物所利用，導致微生物對芘的降解周期長、降解效率低。

有些研究人員在培養基中添加Triton X-100、Tween 80、Tween 60等表面活性劑，對芘起到增溶作用，以促進微生物對芘的攝取及分解利用。有些研究人員在培養基中添加玉米淀粉、麥麩、葡萄糖等，提高芘降解前期的菌體量，以提高芘降解率。但是，這些方法對芘的降解率仍然不高。

因此，有必要繼續尋找促進微生物降解芘的方法。

發明內容

本發明的首要目的在于克服現有技術的缺點與不足，提供一種添加檸檬酸鈉促進銅綠假單胞菌降解芘的方法。

本發明的另一目的在于提供所述添加檸檬酸鈉促進銅綠假單胞菌降解芘的方法的應用。

本發明的目的通過下述技術方案實現：一種添加檸檬酸鈉促進銅綠假單胞菌降解芘的方法，包括如下步驟：在存在芘的環境中加入檸檬酸鈉和銅綠假單胞菌，通過檸檬酸鈉促進銅綠假單胞菌降解芘。

所述的添加檸檬酸鈉促進銅綠假單胞菌降解芘的方法，更優選包括如下步驟：在存在芘的環境中加入檸檬酸鈉、銅綠假單胞菌、氮源和無機鹽，通過檸檬酸鈉促進銅綠假單胞菌降解芘，氮源和無機鹽有利于銅綠假單胞菌的生長。

所述的環境包括水體和土壤；優選為水體。

所述的銅綠假單胞菌優選銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)PA06，其于2017年3月6日保藏于位于中國武漢武漢大學的中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO：M2017082。

所述的銅綠假單胞菌是處于對數增生長期中后期的銅綠假單胞菌。

所述的處于對數增生長期中后期的銅綠假單胞菌，優選通過如下步驟制備得到：以檸檬酸鈉為碳源配制適宜銅綠假單胞菌生長的液體培養基，經除菌后，接種銅綠假單胞菌菌種，振蕩培養至菌體處于對數增生長期中后期。

所述的液體培養基的組成優選如下：檸檬酸鈉15～20g/L，蛋白胨5～10g/L，KH₂PO₄2～2.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.4～0.5g/L；水為溶劑，pH為6.5～7.5。