[發明專利]一種CRISPR單堿基修復系統及其應用在審
| 申請號： | 201811284549.2 | 申請日： | 2018-10-30 |
| 公開（公告）號： | CN109517845A | 公開（公告）日： | 2019-03-26 |
| 發明（設計）人： | 胡爭;周燦權;樊惟文;麥慶云 | 申請（專利權）人： | 中山大學附屬第一醫院 |
| 主分類號： | C12N15/90 | 分類號： | C12N15/90;C12N15/85;C12N15/10;A61K48/00;A61P7/06 |
| 代理公司： | 廣州三環專利商標代理有限公司 44202 | 代理人： | 顏希文;羅堯 |
| 地址： | 510080 *** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 單堿基 修復系統 堿基 單鏈寡核苷酸 地中海貧血 堿基序列 點突變 修復 供體 突變 基因突變位點 真核表達載體 細胞 表達質粒 定向改造 臨床應用 單基因 野生型 基因 無痕 轉染 制備 治療 應用 誘導 疾病 | ||
1.一種CRISPR單堿基修復系統，其特征在于，包括能表達sgRNA和Cas9的真核表達載體，以及作為供體模板的單鏈寡核苷酸，其中，
所述單鏈寡核苷酸的堿基序列與以需要修復的單堿基兩側第30～60個堿基之間的堿基序列基本一致，區別在于，在所述供體模板上，與需要修復的單堿基相應的堿基為未突變野生型的堿基，以及需要修復的單堿基的一側發生了無義突變。
2.根據權利要求1所述的修復系統，其特征在于，所述單鏈寡核苷酸的兩端至少有1個堿基具有硫代修飾。
3.根據權利要求2所述的修復系統，其特征在于，所述單鏈寡核苷酸的兩端有2個堿基具有硫代修飾。
4.根據權利要求1所述的修復系統，其特征在于，所述單鏈寡核苷酸的長度為70～100bp。
5.根據權利要求1所述的修復系統，其特征在于，所述需要修復的單堿基為致病突變β珠蛋白基因的CD17A→T中的堿基T。
6.根據權利要求5所述的修復系統，其特征在于，編碼所述sgRNA的堿基序列如SEQ IDNO.1或SEQ ID NO.2所示，所述單鏈寡核苷酸的堿基序列如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示。
7.根據權利要求5所述的修復系統，其特征在于，所述真核表達載體為PX330。
8.權利要求1～7任一項所述的修復系統在制備治療β珠蛋白基因CD17A→T點突變導致的β地中海貧血病的藥物中的應用。
9.一種治療β珠蛋白基因CD17A→T點突變導致的β地中海貧血病的藥物，其特征在于，所述藥物中含有如權利要求5～7任一項所述的修復系統。
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