[發明專利]一種分離PEG修飾蛋白樣品中游離PEG的高效液相色譜方法在審
| 申請號： | 201811283408.9 | 申請日： | 2018-10-31 |
| 公開（公告）號： | CN109030669A | 公開（公告）日： | 2018-12-18 |
| 發明（設計）人： | 周曉盼;黃學英 | 申請（專利權）人： | 蘇州賽分科技有限公司 |
| 主分類號： | G01N30/02 | 分類號： | G01N30/02;G01N30/06;G01N30/54 |
| 代理公司： | 北京集佳知識產權代理有限公司 11227 | 代理人： | 常亮 |
| 地址： | 215123 江蘇省蘇州市工*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 游離PEG 高效液相色譜 蛋白樣品 流動相 高效液相色譜分析法 蒸發光散射檢測器 三氟乙酸水溶液 檢測器 三氟乙酸乙腈 三氟乙酸 色譜條件 樣品進樣 乙腈溶液 控制柱 色譜柱 粒徑 柱溫 蛋白 分析 聯合 | ||
1.一種分離PEG修飾蛋白樣品中游離PEG的高效液相色譜方法，其特征在于，將含有游離PEG的PEG修飾蛋白樣品采用高效液相色譜進行分離，所述高效液相色譜的色譜條件為：
以聚苯乙烯二乙烯基苯為基質的色譜柱作為檢測用柱，所述色譜柱的規格為4.6mm內徑×150mm長度，5μm粒徑，孔徑；
流動相A相為0.1％三氟乙酸水溶液，B相為0.1％三氟乙酸乙腈溶液；
檢測器為蒸發光散射檢測器；
柱溫為10～80℃；
流速為0.2～1.2mL/min；
樣品進樣量為8～12μL。
2.根據權利要求1所述的高效液相色譜方法，其特征在于，所述PEG修飾蛋白樣品為采用含10mg/mL組氨酸、100mM氯化鈉的20mM檸檬酸緩沖液稀釋后得到的待測溶液。
3.根據權利要求2所述的高效液相色譜方法，其特征在于，所述待測溶液中PEG修飾蛋白樣品的濃度為5～15mg/mL。
4.根據權利要求1所述的高效液相色譜方法，其特征在于，所述流動相A相為經過超聲脫氣、0.45μm水系濾膜過濾所得的水溶液，所述B相為經過超聲脫氣、0.45μm有機濾膜過濾所得的乙腈溶液。
5.根據權利要求1所述的高效液相色譜方法，其特征在于，所述高效液相色譜采用流動相A相和B相進行梯度洗脫，所述梯度洗脫為：0～20min，50％B～72％B。
6.根據權利要求1所述的高效液相色譜方法，其特征在于，所述柱溫為80℃。
7.根據權利要求1所述的高效液相色譜方法，其特征在于，所述流速為0.8mL/min。
8.根據權利要求1所述的高效液相色譜方法，其特征在于，所述蒸發光散射檢測器漂移管溫度為60～80℃，氣體流速為1.2～1.8L/min。
9.根據權利要求1所述的高效液相色譜方法，其特征在于，所述樣品進樣量為10μL。
10.根據權利要求1至9中任一項所述的高效液相色譜方法，其特征在于，所述高效液相色譜方法還包括定量分析的步驟，所述定量分析為以游離PEG標準溶液為待測樣品，采用權利要求1至9中任一項高效液相色譜方法中的色譜條件進行檢測，繪制標準曲線，得到PEG修飾蛋白樣品中游離PEG的含量。
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