[發明專利]懷遠白花玉石籽石榴無性快速培育方法

在審

• 申請號: 201811281703.0
• 申請日: 2018-10-31
• 公開（公告）號: CN109496840A
• 公開（公告）日: 2019-03-22
• 發明（設計）人: 錢晶晶;胡友軍;高青海
• 申請（專利權）人: 安徽科技學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京科家知識產權代理事務所(普通合伙) 11427
• 代理人: 陳娟

1.一種懷遠白花玉石籽石榴無性快速培育方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)外植體選擇及預處理：選擇健壯的無病蟲害玉石籽石榴的新生腋芽、嫩莖段及新生葉片，作為組織培養的外植體，用流水沖洗10min后采用10mg/L GA₃浸泡30min后備用；

2)外植體接種：

腋芽接種：取上述GA₃浸泡好的腋芽，用75％酒精浸泡30sec后移入超凈工作臺，在超凈工作臺上，先用無菌水沖洗3遍，再用解剖針剝去芽鱗，后用0.1％HgCl₂消毒8min，無菌水沖洗5遍后切去腋芽下方木質部，接種于初代腋芽接種培養基上；

莖段接種：取上述GA₃浸泡好的莖段用75％酒精浸泡30sec后移入超凈工作臺，在超凈工作臺上，先用無菌水沖洗3遍，后用0.1％HgCl₂消毒5min，無菌水沖洗5遍，切長1.0-1.5cm、只含1個節點的莖段，接種在初代莖段培養基上；

葉片接種：取上述GA₃浸泡好的葉片用75％酒精浸泡30sec后移入超凈工作臺，在超凈工作臺上，先用無菌水沖洗3遍，后用0.1％HgCl₂消毒3min，無菌水沖洗5遍，將葉片切成1.0*1.0cm²小塊，并將葉片背面劃傷，將背面貼向培養基，接種于初代葉片接種培養基上；

3)增殖培養：上述腋芽接種25d、莖段接種20d、葉片接種40d后，將生長好外植體取切成1.5-2cm莖段，每段含有1-2個莖節，接種于增殖培養基中，在培養室培養35-40d；

4)生根培養：上述外植體增殖培養35-40d后，將外植體切除底部愈傷，然后接種于生根培養基中，在培養室培養45d；

5)煉苗：打開組培瓶蓋，進行煉苗，煉苗時間為3-5d；

6)移栽：煉苗后，挑選健壯幼苗洗凈根部培養基，移栽到基質育苗盤中，放置于溫室中，光照為自然光照，溫度為16-30℃，空氣相對濕度70％，每日早晚于葉片上噴水，保持葉面及土壤濕潤，每隔兩周噴施稀釋10倍WPM工作液，移栽30d后，大田種植。

2.根據權利要求1所述的懷遠白花玉石籽石榴無性快速培育方法，其特征在于，所述步驟1)中外植體來源是懷遠縣石榴協會天榴坊基地。

3.根據權利要求1所述的懷遠白花玉石籽石榴無性快速培育方法，其特征在于，步驟2)中外植體接種時間為3-9月份。

4.根據權利要求1所述的懷遠白花玉石籽石榴無性快速培育方法，其特征在于，步驟2)中培養室的培養條件為：光照3000LX，溫度24-26℃，光照時間12h/d，相對濕度在60％，培養時間為35-40d。

5.根據權利要求1所述的懷遠白花玉石籽石榴無性快速培育方法，其特征在于，步驟2)中腋芽和嫩莖段的接種培養基成分如下：WPM培養基，1mg/L 6-BA，0.5g/L活性炭，20g蔗糖，5.5g瓊脂，pH為6.2-6.5。

6.根據權利要求1所述的懷遠白花玉石籽石榴無性快速培育方法，其特征在于，步驟2)葉片的接種培養基成分如下：MS培養基，0.8mg/L 6-BA，0.5mg/LNAA，0.5g/L活性炭，20g蔗糖，5.5g瓊脂，pH為6.2-6.5。

7.根據權利要求1所述的懷遠白花玉石籽石榴無性快速培育方法，其特征在于，步驟3)中增值培養的培養基成分如下：WPM培養基，0.8mg/L 6-BA，1.5g/L活性炭，20g蔗糖，5.5g瓊脂，pH為6.2-6.5。

8.根據權利要求1所述的懷遠白花玉石籽石榴無性快速培育方法，其特征在于，步驟4)中生根培養的培養基成分如下：WPM培養基+1mg/L IBA+20g蔗糖+5.5g瓊脂，pH為6.2-6.5。