[發明專利]一種外源表達BAK1蛋白的方法有效
| 申請號： | 201811280276.4 | 申請日： | 2018-10-30 |
| 公開（公告）號： | CN109402174B | 公開（公告）日： | 2022-07-08 |
| 發明（設計）人： | 湯嬌;孫亞東;韓志富;柴繼杰;石巍 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院蜜蜂研究所 |
| 主分類號： | C12N15/866 | 分類號： | C12N15/866;C12N9/12;C12Q1/48 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 100093*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 表達 bak1 蛋白 方法 | ||
1.一種外源表達BAK1蛋白的方法，其特征在于，包括步驟：
(1)獲得BAK1胞外結構域的外顯子基因；BAK1胞外結構域的外顯子基因通過以下方法獲得：以擬南芥cDNA為模板，以SEQ ID NO.4-5所示的核苷酸序列為引物擴增得到；
所述BAK1胞外結構域的外顯子基因的C末端加上His標簽，采用在3’-5’端引物上加上6個組氨酸密碼子序列和終止密碼子序列，使閱讀框一直向下讀取直至到讀取完His標簽的密碼子，然后讀取完終止密碼子，翻譯結束；
(2)采用BamH1和Xho1對BAK1片段和真核表達載體分別進行酶切，酶切后將BAK1片段連入真核表達載體上，得到外源表達載體；
所述BAK1片段是帶有N端自身信號肽的步驟(1)所述BAK1胞外結構域的外顯子基因，所述帶有N端自身信號肽的序列如SEQ ID NO.3所示；所述真核表達載體為pFastBacTM1；
(3)外源表達載體轉染昆蟲細胞，獲得重組桿狀病毒，病毒侵染昆蟲細胞，培養該昆蟲細胞后，收獲細胞和上清，通過SDS-PAGE驗證正確構象蛋白時采用不含有DTT的loadingbuffer；上清液經層析，純化后獲得構象正確的BAK1蛋白；
其中，BAK1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；
其中，步驟(1)所述BAK1胞外結構域的外顯子基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.權利要求1所述的方法制備得到的BAK1蛋白。
3.權利要求1所述的方法或權利要求2所述的BAK1蛋白的以下任一種應用：
(1)在篩選可以激活植物免疫反應的小分子藥物中的應用；
(2)在研制植物抗病藥中的應用；
(3)在提高植物抗病表型或提高植物產量中的應用。
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