[發明專利]一種外源表達FLS2蛋白的方法

在審

• 申請號: 201811280260.3
• 申請日: 2018-10-30
• 公開（公告）號: CN109402142A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 湯嬌;孫亞東;韓志富;柴繼杰;石巍
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蜜蜂研究所
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/866;C12N15/66;C07K14/415
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種外源表達FLS2蛋白的方法，其特征在于，包括步驟：

(1)構建含有桿狀病毒來源的抑血細胞聚集素Hemolin信號肽的載體；

(2)克隆得到FLS2外顯子基因，將FLS2外顯子基因連入步驟(1)的載體上，得到外源表達載體；

(3)外源表達載體轉染昆蟲細胞，獲得重組桿狀病毒，病毒侵染昆蟲細胞，培養該昆蟲細胞后，收獲細胞和上清，上清液經層析，純化后獲得構象正確的FLS2蛋白。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述載體的構建方法是在pFastBac^TM1的BamH1酶切位點前加入Hemolin信號肽得到pFastBac^TMHem載體；所述Hemolin信號肽的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，FLS2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，FLS2外顯子基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。

5.根據權利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，步驟(2)的FLS2外顯子基因連入載體前采用BamH1和Sal1酶切FLS2外顯子基因。

6.根據權利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，采用BamH1和Xho1酶切步驟(1)構建得到的載體，酶切后與FLS2外顯子基因連接，構建外源表達載體。

7.根據權利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述昆蟲細胞為Hi5細胞。

8.權利要求1-7任一所述方法制備得到的FLS2蛋白。

9.一種表達FLS2蛋白的外源表達載體，其特征在于，該載體上與目的基因N端連接的前端加入一段桿狀病毒來源的抑血細胞聚集素Hemolin信號肽；優選為載體pFastBac^TMHem，是在載體pFastBac^TM1的BamH1酶切位點前加入Hemolin信號肽得到，所述Hemolin信號肽的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

10.權利要求1-7任一所述的方法或權利要求8所述的FLS2蛋白或權利要求9所述的外源表達載體在篩選可以激活植物免疫反應的小分子藥物或研制植物抗菌藥或提高植物抗病表型或提高植物產量中的應用。