[發(fā)明專利]一種制備脫細(xì)胞生物組織材料的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811278649.4
• 申請(qǐng)日: 2018-10-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111110917A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-05-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何海紅;尹宗明;趙婧;桂寶珠;陳國(guó)明;李雨
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海微創(chuàng)心通醫(yī)療科技有限公司
• 主分類號(hào): A61L27/36
• 分類號(hào): A61L27/36
• 代理公司: 上海思捷知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31295
• 代理人: 王宏婧

1.一種制備脫細(xì)胞生物組織材料的方法，其特征在于，包括凍融處理、超高壓處理和去核酸三道工序，其中超高壓處理采用的壓力為400-600MPa。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述制備脫細(xì)胞生物組織材料的方法，其特征在于，所述方法具體包括如下步驟：

步驟一，將生物組織上的脂肪剝離并對(duì)所述生物組織進(jìn)行修剪和清洗；

步驟二，凍融處理：將步驟一處理后的生物組織反復(fù)凍融多次；

步驟三，超高壓處理：將步驟二處理后的生物組織清洗密封，置于超高壓儀器內(nèi)進(jìn)行超高壓處理；

步驟四，去核酸：將步驟三處理后的生物組織，用核酸酶去除細(xì)胞殘余核酸組分；

步驟五，保存：將步驟四處理后的生物組織清洗后密封保存。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述制備脫細(xì)胞生物組織材料的方法，其特征在于，所述步驟一具體包括如下步驟：無(wú)菌磷酸鹽緩沖液浸沒(méi)無(wú)紡布，將生物組織在浸潤(rùn)的無(wú)紡布上鋪開(kāi)，剝?nèi)ブ窘M織層，然后將生物組織的纖維層朝上，用無(wú)塵布去除生物組織表面脂肪并剪去游離纖維，然后將生物組織裁切成規(guī)則小片進(jìn)行后續(xù)處理，最后用生理鹽水在室溫下清洗多次，每次清洗3～5分鐘。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述制備脫細(xì)胞生物組織材料的方法，其特征在于，所述凍融單次過(guò)程如下：將生物組織置于4℃預(yù)冷10～20min、然后在-80℃±10℃冷凍1.5～2h，最后在37℃水浴復(fù)溫15～20min。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述制備脫細(xì)胞生物組織材料的方法，其特征在于，所述步驟三具體包括如下步驟：在無(wú)菌D-Hanks溶液中清洗后置入浸滿D-Hanks溶液的塑料袋中密封，再將密封于塑料袋的生物組織置入超高壓機(jī)器內(nèi)，在400～500MPa以及4℃條件下處理20～30min。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述制備脫細(xì)胞生物組織材料的方法，其特征在于，所述步驟四具體包括如下步驟：將生物組織置于核酸酶溶液中，在37℃恒溫?fù)u床中以100r/min的振蕩速度沖洗24～72h。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述制備脫細(xì)胞生物組織材料的方法，其特征在于，所述核酸酶溶液中含有核糖核酸酶A(RNase A)和脫氧核糖核酸酶I(DNase I)，所述RNase A的濃度為10～20μg/mL，所述DNase I的濃度為100～200μg/mL。

8.根據(jù)權(quán)利要求2所述制備脫細(xì)胞生物組織材料的方法，其特征在于，所述步驟五具體包括如下步驟：用磷酸鹽緩沖液漂洗所述生物組織1天后，置入4℃、含有抗生素的磷酸鹽緩沖液中密封保存。

9.根據(jù)權(quán)利要求2所述制備脫細(xì)胞生物組織材料的方法，其特征在于，提取的新鮮生物組織經(jīng)預(yù)處理后運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室，當(dāng)日進(jìn)行所述步驟一；所述新鮮生物組織選自牛心包、豬心包、牛心臟瓣膜、豬心臟瓣膜、豬小腸、牛血管、豬血管、牛皮或豬皮。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述制備脫細(xì)胞生物組織材料的方法，其特征在于，所述預(yù)處理包括如下步驟：將獲取的新鮮生物組織置于3-5℃的無(wú)菌生理鹽水中，采用pH值為6.8～8.6的磷酸鹽緩沖液或pH值為6.8～8.6的D-Hanks溶液在室溫下清洗多次，每次3-5分鐘，直至生物組織無(wú)血跡或血水，最后將清洗達(dá)標(biāo)的生物組織保存在含有抗生素的生理鹽水中。