[發明專利]一種非典型豬瘟病毒E2蛋白重組桿狀病毒及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201811275858.3
• 申請日: 2018-10-30
• 公開（公告）號: CN109295014B
• 公開（公告）日: 2021-08-17
• 發明（設計）人: 錢平;李祥敏;張華偉;文威;陳煥春
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/866;A61K39/12;A61P31/20;C12R1/93
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

本發明提供了一種非典型豬瘟病毒E2蛋白重組桿狀病毒AC?4?APPV E2及其制備方法和應用，屬于獸用疫苗技術領域，本發明提供的所述非典型豬瘟病毒E2蛋白重組桿狀病毒保藏于中國典型培養物保藏中心保藏CCTCC，保藏號為CCTCC NO：V201855。所述非典型豬瘟病毒E2蛋白重組桿狀病毒AC?4?APPV E2能夠用于制備亞單位疫苗，免疫仔豬后能產生針對APPV的特應性免疫反應。利用本發明所述E2’蛋白重組桿狀病毒AC?4?APPV E2可獲得大量與天然病毒抗原性相似的E2’抗原，作為診斷抗原特異性強，靈敏度高，診斷迅速；作為目的抗原制備的基因工程疫苗高效、安全。

技術領域

本發明屬于獸用疫苗技術領域，尤其涉及一種非典型豬瘟病毒E2蛋白重組桿狀病毒及其制備方法和應用。

背景技術

仔豬先天性震顫(Congenital tremors ofpiglet,CT)，俗稱“仔豬抖抖病”、“仔豬跳跳病”，指剛出生仔豬表現為頭部或四肢嚴重震顫的一種疾病，其大腦和脊髓有明顯的病理學損傷。目前，該病尚無有效的治療措施，給養豬生產造成較大的經濟損失。1922年Kinsley在美國首次記錄此病，命名為仔豬跳舞病，1937年Hindmarsh在澳大利亞報道，以后歐洲、北美洲與南美洲陸續報道了此病。1960年國內首次報道此病，以后山東、江蘇、湖南、河南等省都有此病報道，表明此病在我國廣泛存在。2015年美國學者Ben M.Hause通過下一代測序技術(Next-generation sequencing,NGS)發現一種新型的豬源瘟病毒，因不同于豬瘟病毒，該病毒暫時命名為非典型豬瘟病毒(Atypical Porcine Pestivirus，APPV)。隨后，2016年另一位美國學者Bailey L.Arruda1在仔豬先天性震顫的樣品中使用下一代測序技術驗證了APPV的存在，并通過病料回歸實驗驗證APPV是否是仔豬先天性震顫的病原，結果表明，APPV是一種新型的豬源瘟病毒，而且感染APPV導致仔豬先天性震顫。非典型豬瘟病毒(APPV)基因組大小約11500～11276bp，包括4個結構蛋白C、Erns、E1和E2的基因，以及7個非結構蛋白Npro、P7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B的基因。E2蛋白是APPV的囊膜蛋白，全長241氨基酸。生物信息學分析APPV E2上有多個B細胞表位，被認為是APPV的免疫原性基因。

目前沒有治療APPV的藥物和疫苗用于該病毒感染的預防和控制。因此，當務之急是開發一種安全有效的仔豬先天性震顫的疫苗。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種能夠有效的應用于仔豬先天性震顫疫苗制備的非典型豬瘟病毒E2蛋白重組桿狀病毒。

為了實現上述目的，本發明提供了一種非典型豬瘟病毒E2蛋白重組桿狀病毒AC-4-APPV E2，所述非典型豬瘟病毒E2蛋白重組桿狀病毒保藏于中國典型培養物保藏中心保藏CCTCC，保藏號為CCTCC NO：V201855。

本發明還提供了所述的非典型豬瘟病毒E2蛋白重組桿狀病毒AC-4-APPV E2的制備方法，包括以下步驟：

1)PCR擴增獲得跨膜區片段缺失的編碼E2’蛋白的核苷酸序列e2'；所述e2'的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

2)將步驟1)中所述e2'與pEASYBLUNT載體連接獲得pEASYBLUNT-APPV E2重組載體；