[發明專利]一種非典型豬瘟病毒E2蛋白重組桿狀病毒及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201811275858.3
• 申請日: 2018-10-30
• 公開（公告）號: CN109295014B
• 公開（公告）日: 2021-08-17
• 發明（設計）人: 錢平;李祥敏;張華偉;文威;陳煥春
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/866;A61K39/12;A61P31/20;C12R1/93
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

1.一種非典型豬瘟病毒E2蛋白重組桿狀病毒AC-4-APPV E2，其特征在于，所述非典型豬瘟病毒E2蛋白重組桿狀病毒保藏于中國典型培養物保藏中心CCTCC，保藏號為CCTCC NO：V201855。

2.權利要求1所述的非典型豬瘟病毒E2蛋白重組桿狀病毒AC-4-APPV E2的制備方法，包括以下步驟：

1）PCR擴增獲得跨膜區片段缺失的編碼e2'蛋白的核苷酸序列e2'；所述e2'的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

2）將步驟1）中所述e2'與pEASYBLUNT載體連接獲得pEASYBLUNT-APPV E2重組載體；

3）以步驟2）中獲得的pEASYBLUNT-APPV E2重組載體為模板，用4組引物對分別進行PCR擴增獲得連接有BamHI和EcoRI酶切位點的e2'目的片段，連接有SpeI和NotI酶切位點的e2'目的片段，連接有SaIL和HindIII酶切位點的e2'目的片段；以及連接有KpnI和XhoI酶切位點的e2'目的片段；其中第一組引物對的序列如SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示；第二組引物對的序列如SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示；第三組引物對的序列如SEQ ID No.9和SEQID No.10所示；第四組引物對的序列如SEQ ID No.11和SEQ ID No.12所示；

4）將步驟3）中所述的連接有BamHI和EcoRI酶切位點的e2'目的片段，連接有SpeI和NotI酶切位點的e2'目的片段，連接有SaIL和HindIII酶切位點的e2'目的片段；和連接有KpnI和XhoI酶切位點的e2'目的片段連接到桿狀病毒轉移載體PFBDHmHNM1P10eEFP中獲得第二重組載體，并在所述第二重組載體中的4個e2'目的片段前分別插入HBM信號肽序列，獲得桿狀病毒轉移載體PFBD-4-APPVE2；

5）將步驟4）中所述的桿狀病毒轉移載體PFBD-4-APPVE2轉染昆蟲細胞，培養至細胞出現病變，收集上清液獲得重組桿狀病毒AC-4-APPV E2。

3.權利要求1所述的非典型豬瘟病毒E2蛋白重組桿狀病毒AC-4-APPV E2或權利要求2所述的制備方法制備獲得的非典型豬瘟病毒E2蛋白重組桿狀病毒AC-4-APPV E2在制備防治仔豬先天性震顫疫苗中的應用。

4.根據權利要求3所述應用，其特征在于，所述防治仔豬先天性震顫疫苗為亞單位疫苗。

5.一種防治仔豬先天性震顫的疫苗，其特征在于，所述疫苗包括權利要求1所述的非典型豬瘟病毒E2蛋白重組桿狀病毒AC-4-APPV E2表達的E2’蛋白和佐劑。

6.根據權利要求5所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗中E2’蛋白的濃度為25~35μg/ml。

7.根據權利要求5或6所述的疫苗，其特征在于，所述佐劑為SEPPIC ISA-201佐劑。