[發明專利]一種酶法拆分制備(R)-1-(1-萘基)乙胺的方法

在審

• 申請號: 201811275317.0
• 申請日: 2018-10-30
• 公開（公告）號: CN109234352A
• 公開（公告）日: 2019-01-18
• 發明（設計）人: 汪斌;貢潔;翁居軾;楊鳳麗;陳舟;梁國斌;葉招蓮;劉維橋
• 申請（專利權）人: 江蘇理工學院
• 主分類號: C12P41/00
• 分類號: C12P41/00;C12P13/00;C12R1/72
• 代理公司: 常州佰業騰飛專利代理事務所(普通合伙) 32231
• 代理人: 高姍

本發明提供一種化學酶法制備(R)?1?(1?萘基)乙胺的方法，該方法以固體超強堿負載納米鈀，得到固定化鈀；環氧樹脂載體表面共價結合南極假絲酵母脂肪酶B(CALB)，得到固定化CALB。在反應體系A中，以固定化CALB為催化劑，以甲苯為溶劑，乙氧基乙酸乙酯為酰基供體，(R)?1?(1?萘基)乙胺選擇性被酯化，反應結束后固液分離，固定化CALB留在反應體系A中，液相從反應系統A中移出進入反應體系B中，該方法將鈀催化劑固定化，提高了其重復使用率。

技術領域

本發明涉及一種生物拆分法，具體涉及(R)-1-(1-萘基)乙胺的化學酶法制備方法。

背景技術

(R)-1-(1-萘基)乙胺是制備重要的手性切塊，目前拆分制備(R)-1-(1-萘基)乙胺的方法主要包括化學法和酶法：

化學拆分法：以L-天冬氨酸(CN101407465A)、手性萘普生(如國際專利文獻WO2008058235A2)、手性酒石酸(如國際專利文獻WO2004110976A2、中國專利文獻CN101735070A、中國專利文獻CN103420845A)等手性拆分劑與1-(1-萘基)乙胺消旋體成鹽，利用不同手性1-(1-萘基)乙胺鹽在溶劑中的溶解度不同，通過結晶將(S)-1-(1-萘基)乙胺和(R)-1-(1-萘基)乙胺分離。該過程流程比較長，且理論收率最大只有50％。

酶法拆分法：由于化學拆分劑的缺點，人們選擇了酶作為拆分劑。酶法拆分的優點在于：條件溫和，底物識別性好，產品純度高。但是酶法拆分最高拆分理論收率是50％。為了提高收率，在酶法拆分的基礎上結合消旋工藝，實現了1-(1-萘基)乙胺動態動力學拆分。

如以下反應式所示，(R)-1-(1-萘基)乙胺在脂肪酶作用下酯化，同時(S)-1-(1-萘基)乙胺在鈀催化劑作用下加氫消旋，拆分和消旋在一個步驟中進行。(R)-1-(1-萘基)乙胺酯化物水解萃取后得到(R)-1-(1-萘基)乙胺。

該工藝路線較短，但是鈀催化劑容易脫落，重復利用性差；同時金屬鈀與酶直接接觸，酶易于失活。因此，提高鈀催化劑利用率以及提高酶催化速率是該工藝路線需要解決的最大問題。

發明內容

本發明目的是提供一種動態動力學法化學酶法拆分1-(1-萘基)乙胺，獲得(R)-1-(1-萘基)乙胺酯化物，接著在堿性條件下水解得到(R)-1-(1-萘基)乙胺。主要解決目前鈀催化劑易于脫落，酶法反應速度慢等問題，提高鈀催化劑重復使用率以及南極假絲酵母脂肪酶B拆分的反應速率。

實現本發明采用的技術方案為：

本發明一種酶法拆分制備(R)-1-(1-萘基)乙胺的方法，該方法為包括以下步驟：

(1)固定化CALB制備：配置南極假絲酵母脂肪酶B酶液，以下簡稱CALB，往酶液中加入環氧樹脂，在25℃下攪拌3h后，將環氧樹脂從酶液中分離，并用pH＝7.0緩沖液洗滌，真空干燥，得到固定化CALB，酶蛋白所占固定化酶的重量百分比為1.0-3.0％；

(2)反應體系A：在甲苯溶劑中，加入步驟(1)制得的固定化CALB、1-(1-萘基)乙胺消旋體、乙氧基乙酸乙酯，在40-70℃的溫度下恒溫反應9-15h，反應結束后固液分離，固定化CALB留在反應體系A中，液相從反應系統A中移出，得的液體備用；

(3)反應體系B：將步驟(2)得到的液體進入反應體系B中，加入固定化納米鈀、H₂壓力0.01-0.04MPa，在60-100℃的溫度下恒溫反應6-10h，反應結束后進行固液分離，液相再進入反應體系A中反應，反應結束后進行固液分離，所得液相再進入反應體系B中，如此循環1-10次，得循環反應后的液相；

(4)柱分離：將步驟(3)所得的循環反應后的液相以石油醚和異丙醇(1∶1)為流動相，柱層析分離油狀物，得到(R)-1-(1-萘基)乙胺乙酯；