[發明專利]家畜血細胞制備動物細胞培養液的方法及其制得的動物細胞培養液的應用在審
| 申請號： | 201811274111.6 | 申請日： | 2018-10-30 |
| 公開（公告）號： | CN109468262A | 公開（公告）日： | 2019-03-15 |
| 發明（設計）人： | 李勇;陳曄洲;段生寶;王紅梅;丁少華;魏雙施 | 申請（專利權）人： | 中國科學院蘇州生物醫學工程技術研究所 |
| 主分類號： | C12N5/00 | 分類號： | C12N5/00 |
| 代理公司： | 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369 | 代理人： | 韓飛 |
| 地址： | 215163 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 血細胞 動物細胞培養液 家畜 細胞培養液 制備動物 裂解液 淋巴細胞分離液 促進細胞增殖 培養動物細胞 微孔濾膜過濾 基本培養基 細胞培養基 新生牛血清 比例添加 動物倫理 反復凍融 離心收集 胎牛血清 自然沉降 超聲法 牛血清 上清液 裂解 全血 制備 商品化 應用 替代 | ||
1.一種家畜血細胞制備動物細胞培養液的方法，其特征在于，包括以下步驟：將牛、羊、馬、豬或其他家畜采全血后經離心、自然沉降或淋巴細胞分離液等方法分離得到血細胞；然后采用反復凍融法或超聲法裂解血細胞，離心收集上清液，經微孔濾膜過濾后得到血細胞裂解液。
2.根據權利要求1所述的家畜血細胞制備動物細胞培養液的方法，其特征在于，其中，所述微孔濾膜選用0.22μm膜。
3.根據權利要求2所述的家畜血細胞制備動物細胞培養液的方法，其特征在于，包括以下步驟：
1)將牛、羊、馬、豬或其他家畜采全血后收集在含有抗凝劑的血袋中；
2)經離心、自然沉降或淋巴細胞分離液等方法分離得到血細胞(包括白細胞或血小板)；
3)裂解血細胞；
4)4000g下離心20分鐘，收集上清液；
5)將所得溶液經過0.22μm膜過濾，制備得到血細胞裂解液，-20℃保存備用。
4.根據權利要求3所述的家畜血細胞制備動物細胞培養液的方法，其特征在于，其中的血細胞為白細胞或血小板。
5.根據權利要求4所述的家畜血細胞制備動物細胞培養液的方法，其特征在于，所述步驟3)中采用反復凍融法裂解血細胞，具體為將血細胞置于-80℃/4℃反復凍融2-6次。
6.根據權利要求5所述的家畜血細胞制備動物細胞培養液的方法，其特征在于，所述步驟3)中采用反復凍融法裂解血細胞，具體為將血細胞置于-80℃/4℃反復凍融5次。
7.根據權利要求4所述的家畜血細胞制備動物細胞培養液的方法，其特征在于，所述步驟3)中采用超聲法裂解血細胞，具體為在130W的功率下超聲10秒停10秒反復進行，共計5分鐘。
8.一種如權利要求1-7中任意一項所述的家畜血細胞制備動物細胞培養液的方法制得的動物細胞培養液的應用，其特征在于，培養動物細胞時，將由所述方法制得的血細胞裂解液作為動物細胞培養液完全或部分替代牛血清，以5％-30％的比例添加到商品化的基本培養基中。
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