[發(fā)明專利]測定人血清中萬古霉素和降解產(chǎn)物濃度的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811272243.5
• 申請日: 2018-10-26
• 公開（公告）號: CN111103363A
• 公開（公告）日: 2020-05-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 范亞新;陳淵成;張菁;郁繼誠;彭小林
• 申請（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 上海元一成知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

本發(fā)明屬藥物濃度監(jiān)測技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜法LC?MS/MS同時測定人血清中萬古霉素和晶狀降解產(chǎn)物CDP?1的濃度的方法。本方法以去甲萬古霉素為內(nèi)標(biāo)，采用甲酸酸化血清后加入定量的乙腈沉淀蛋白，以乙腈和甲酸水作為流動相，通過LC?MS/MS法測定人血清萬古霉素和CDP?1的濃度。本方法樣品取樣量少，預(yù)處理簡單、快速，可用于常規(guī)臨床患者血清樣本中萬古霉素和降解產(chǎn)物CDP?1的濃度測定，尤其可定量腎功能不全患者血液透析后產(chǎn)生不同程度CDP?1而降低抗菌活性成分萬古霉素濃度，能為臨床制定和調(diào)整萬古霉素個體化給藥方案，能提高臨床療效和細(xì)菌清除率，降低細(xì)菌耐藥性產(chǎn)生，降低腎毒性等毒副反應(yīng)的發(fā)生。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬藥物濃度監(jiān)測技術(shù)領(lǐng)域，涉及檢測人血清中藥物濃度的方法，具體涉及基于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)同時測定人血清中萬古霉素和晶狀降解產(chǎn)物CDP-1(包括2種降謝產(chǎn)物CDP-1-m和CDP-1-M)濃度的方法。

背景技術(shù)

據(jù)資料記載，糖肽類抗生素萬古霉素在臨床治療實踐中已歷經(jīng)60年歷史，主要用于干預(yù)革蘭陽性菌引起的感染，目前仍是治療耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)的首選藥物。醫(yī)療實踐顯示，萬古霉素藥代動力學(xué)個體差異大，安全范圍小，治療窗窄，常發(fā)生腎毒性和耳毒性等不良反應(yīng)，故推薦進(jìn)行治療藥物濃度監(jiān)測(TDM)。現(xiàn)有技術(shù)公開了萬古霉素是時間依賴性的抗生素，藥代動力學(xué)/藥效學(xué)(PK/PD)顯示其療效與24小時下的藥時曲線下面積/最小抑菌濃度(AUC₂₄/MIC)有關(guān)，由于AUC較難直接定量，常采用谷濃度為其替代指標(biāo)。2016年中國藥理學(xué)會制訂了《中國萬古霉素治療藥物濃度監(jiān)測指南》，推薦成人患者萬古霉素血藥濃度應(yīng)維持在10-15mg/L，成人嚴(yán)重MRSA感染者血藥谷濃度應(yīng)維持在10～20mg/L，但是血藥谷濃度≥15mg/L乃是腎毒性發(fā)生率增加的危險因素。

有臨床研究顯示，血液透析患者由于導(dǎo)管污染等原因容易引起感染，革蘭陽性菌是主要的病原菌，美國感染病協(xié)會(IDSA)指南推薦萬古霉素用于MRSA、氨芐西林耐藥腸球菌等導(dǎo)管相關(guān)感染，但萬古霉素的用法用量仍來自國外。為了達(dá)到目標(biāo)靶濃度，IDSA指南推薦對于腎功能不全的患者(包括透析患者)進(jìn)行萬古霉素濃度監(jiān)測，因而根據(jù)血藥濃度監(jiān)測結(jié)果調(diào)整給藥方案，指導(dǎo)臨床個體化用藥，可提高萬古霉素的臨床有效性和安全性，但由于萬古霉素有效濃度范圍較窄，若TDM濃度檢測不準(zhǔn)確，則影響患者的個體化劑量調(diào)整，從而無法達(dá)到精準(zhǔn)治療的目的。

目前，臨床上用于萬古霉素TDM的檢測方法包括，微生物法、免疫法、高效液相法(HPLC)和LC-MS/MS法等；其中，免疫法操作簡便、自動化程度高，是目前萬古霉素TDM常用的方法，但有文獻(xiàn)報道免疫法相較于HPLC法和LC-MS/MS法，測定結(jié)果可能偏高，甚至偏高40％左右，究其原因可能是由于降解產(chǎn)物CDP-1的交互作用。萬古霉素主要經(jīng)腎臟排泄，CDP-1是其在腎臟的晶狀降解產(chǎn)物，由一對異構(gòu)體CDP-1-m和CDP-1-M組成，在透析等腎功能異常的患者中尤為多見。由于TDM血樣來源廣泛，本申請的前期免疫法和HPLC的TDM檢測中，發(fā)現(xiàn)HPLC法容易受雜峰等影響色譜峰的積分，導(dǎo)致測定結(jié)果偏差大；以及在前期的實驗中，發(fā)現(xiàn)目前市售的CDP-1的標(biāo)準(zhǔn)品含有一定量的萬古霉素，由于CDP-1-m、萬古霉素和CDP-1-M均為親水性化合物且極性接近，難以分離到純的標(biāo)準(zhǔn)品，尚需定量CDP-1標(biāo)準(zhǔn)品中三個化合物各自的含量。

目前，有文獻(xiàn)報道采用高效液相色譜法(HPLC)測定萬古霉素和降解產(chǎn)物CDP-1的濃度，但是該方法存在血清用量大，200μL，檢測時間長，35min，特異性差等缺點，且該方法僅是測定CDP-1-m和CDP-1-M的總濃度，無法分別定量其中的2個降解產(chǎn)物，難以滿足目前TDM的要求。

鑒于現(xiàn)有方法存在的問題，本申請的發(fā)明人擬提供一種同時測定人血清中萬古霉素和2個降解產(chǎn)物CDP-1-m和CDP-1-M的液質(zhì)聯(lián)用法。建立該方法后進(jìn)行了一系列方法驗證，滿足2015版藥典的相關(guān)要求，并用于臨床TDM血樣的檢測，特別是血液透析患者。

與本發(fā)明線相關(guān)的參考文獻(xiàn)有：