[發明專利]一種治療類風濕性關節炎中藥組合物的檢測方法

有效

• 申請號: 201811270907.4
• 申請日: 2018-10-29
• 公開（公告）號: CN109187810B
• 公開（公告）日: 2021-06-08
• 發明（設計）人: 張雪;彭富全;何風雷;劉敏
• 申請（專利權）人: 廣州白云山陳李濟藥廠有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 廣州科沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 徐晶

1.一種治療類風濕性關節炎中藥組合物的檢測方法，所述治療類風濕性關節炎的中藥組合物由昆明山海棠、淫羊藿、菟絲子和枸杞子組成，其特征在于，該檢測方法以金絲桃苷、朝藿定B、朝藿定A、朝藿定C、淫羊藿苷、木犀草素、槲皮素、川陳皮素、山奈酚和寶藿苷Ⅰ作為昆明山海棠、淫羊藿、菟絲子和枸杞子的檢測指標；

檢測步驟如下：

S1混合對照品溶液的制備：精密稱定金絲桃苷、朝藿定B、朝藿定A、朝藿定C、淫羊藿苷、木犀草素、槲皮素、川陳皮素、山奈酚和寶藿苷Ⅰ對照品，80%甲醇溶液溶解定容、搖勻，得含有96.8μg/mL金絲桃苷、119.04μg/mL朝藿定B、213.2μg/mL朝藿定A、257.32μg/mL朝藿定C、390μg/mL淫羊藿苷、4.136μg/mL木犀草素、42.24μg/mL槲皮素、16.69μg/mL川陳皮素、24.416μg/mL山奈酚和17.984μg/mL寶藿苷Ⅰ的混合對照品溶液；

S2樣品的制備：精密稱量治療類風濕性關節炎中藥組合物粉末，置于具塞錐形瓶中，精密加入乙醇溶液20mL，所述治療類風濕性關節炎中藥組合物粉末與乙醇溶液物液比為1g:（66-68）mL，稱定重量，超聲20-40min，超聲功率240-260W，室溫冷卻，稱定重量，乙醇溶液補足減輕的重量，搖勻，轉速為10000r/min離心10min，取上清液用0.22μm微孔濾膜過濾，即得待測樣品；

S3色譜條件：高效液相檢測法，流動相A相為乙腈，B相為0.2%磷酸溶液，流速1.0mL/min，柱溫30℃，取步驟S1中混合對照品溶液和S2中待測樣品，進樣，梯度洗脫，洗脫時間和條件如下：

方法中，以金絲桃苷為內參物，分別計算朝藿定B、朝藿定A、朝藿定C、淫羊藿苷、木犀草素、槲皮素、川陳皮素、山奈酚、寶藿苷Ⅰ的相對校正因子?，?的計算公式如下：

?_s/i = ?_s/?_i = (A_s×C_i) / (A_i×C_s)

式中As為內參物對照品S的峰面積，Cs為內參物對照品S的濃度，Ai為某待測成分對照品i的峰面積，Ci為某待測成分對照品i的濃度，按照外標法測定內參物峰面積As，利用各成分的?和內參物的實測值，計算待測樣品成分的含量；

基于以上步驟確立了9種有效成分相對于金絲桃苷的相對校正因子（fs/i），分別為f_{金絲桃苷/朝霍定}A=2.170、f_{金絲桃苷/朝霍定C}=1.217、f_{金絲桃苷/朝霍定B}=0.753、f_{金絲桃苷/淫羊藿苷}=0.999、f_{金絲桃苷/木犀草素}=0.618、f_{金絲桃苷/槲皮素}=0.567、f_{金絲桃苷/川陳皮素}=0.491、f_{金絲桃苷/山奈酚}=0.537和f_{金絲桃苷/寶霍苷I}=0.675；

所述步驟S3中色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠反相色譜柱，柱長250mm，內徑4.6mm，填料孔徑5μm。

2.根據權利要求1所述的治療類風濕性關節炎中藥組合物的檢測方法，其特征在于，所述步驟S2中超聲時間為30min。

3.根據權利要求1所述的治療類風濕性關節炎中藥組合物的檢測方法，其特征在于，所述步驟S2中的乙醇溶液為80%乙醇水溶液。

4.根據權利要求1所述的治療類風濕性關節炎中藥組合物的檢測方法，其特征在于，所述步驟S3的高效液相檢測法的檢測器為多波長選擇的安捷倫二極管陣列檢測器。

5.根據權利要求1所述的治療類風濕性關節炎中藥組合物的檢測方法，其特征在于，所述步驟S3中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、寶藿苷Ⅰ檢測波長為270nm，川陳皮素檢測波長為325nm，金絲桃苷、槲皮素、木犀草素、山奈酚檢測波長為360nm。