[發明專利]一種定量檢測堿性磷酸酶活性的方法

有效

• 申請號: 201811268416.6
• 申請日: 2018-10-29
• 公開（公告）號: CN109270041B
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發明（設計）人: 逯一中;倪朋娟;陳傳霞;姜媛媛
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 上海科律專利代理事務所(特殊普通合伙) 31290
• 代理人: 金碎平

1.一種定量檢測堿性磷酸酶活性的方法，其特征在于，包括如下步驟：

將制備的硼和氮雙摻雜的碳量子點作為熒光探針，抗壞血酸-2-磷酸三鈉鹽作為堿性磷酸酶底物；利用堿性磷酸酶水解抗壞血酸-2-磷酸三鈉鹽形成的抗壞血酸與碳量子點表面的硼酸基團作用，導致碳量子點聚集引起其熒光淬滅，基于碳量子點熒光強度隨堿性磷酸酶加入濃度的變化檢測堿性磷酸酶；

制備碳量子點：將3-氨基苯硼酸溶于超純水中，加入氫氧化鈉溶液，在180℃下進行水熱反應后，得到硼和氮雙摻雜的碳量子點溶液；

將380μL 1M pH 9.8的二乙醇胺緩沖溶液，10μL 50mM MgCl₂，100μL40mM抗壞血酸-2-磷酸三鈉鹽， 10μL制備的碳量子點溶液和490μL超純水依次加入到1.5mL離心管中，混合均勻后，得到堿性磷酸酶檢測液，備用；

取17份堿性磷酸酶檢測液，各加入10μL不同濃度的堿性磷酸酶溶液，控制各堿性磷酸酶溶液的濃度分別為0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0、3.0、4.0、 5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、30.0和50.0mU mL^-1，均混合均勻后，均在37℃下孵育 2h后，進行熒光光譜檢測，得到堿性磷酸酶活性和熒光強度的關系曲線，關系式如式I所示：

(F₀-F)/F₀＝0.004+0.070c I；

式中：c為堿性磷酸酶的活性，單位是mU mL^-1，F₀為空白樣的熒光強度值，F為測試樣的熒光強度值，線性相關系數為0.994。