[發明專利]一種蛋白質類膿毒癥標志物及其在嚴重膿毒癥早期預警的應用及其篩選方法

在審

• 申請號: 201811267919.1
• 申請日: 2018-10-29
• 公開（公告）號: CN109374904A
• 公開（公告）日: 2019-02-22
• 發明（設計）人: 李萌;嚴靜
• 申請（專利權）人: 浙江醫院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 杭州裕陽聯合專利代理有限公司 33289
• 代理人: 姚宇吉

本發明公開了一種蛋白質類膿毒癥標志物及其在嚴重膿毒癥早期預警的應用及其篩選方法，通過iTRAQ?2DLC?MS/MS方法對嚴重膿毒癥不同階段的血清樣本進行檢測和分析，再應用ELISA方法驗證差異蛋白，最終篩選并鑒定出2種特征性差異蛋白，分別是：載脂蛋白CIII，β2微球蛋白；再通過這兩種標志物建立檢測嚴重膿毒癥患者早期預警的聯合檢測模型，利用該檢測模型能夠提高嚴重膿毒癥的早期預警的敏感性和特異性，為預測膿毒癥病情的進展的早期事件，為臨床早期干預提供了參考依據，最終實現降低膿毒癥死亡率。

技術領域

本發明涉及醫藥生物領域，特別是一種蛋白質類膿毒癥標志物及其在嚴重膿毒癥早期預警的應用及其篩選方法。

背景技術

膿毒癥(sepsis)是由感染引起的全身炎癥反應綜合征(systemic inflammatoryresponse syndrome，SIRS)，是導致危重病患者死亡的主要原因。2012年全球膿毒癥聯盟公布的數據顯示，因膿毒癥而死亡的人數超過了前列腺癌、乳腺癌和艾滋病致死人數的總和，排美國死亡因素的前十位；并且在過去十年里，膿毒癥發病率以每年8％至13％的速度劇增。更值得注意的是，一旦病情進展為嚴重膿毒癥(severe sepsis)時，將導致器官功能障礙綜合征和(或) 循環衰竭，嚴重影響患者預后。2007年，我國一項對十所大學附屬醫院的外科重癥監護室的流行病學調查結果顯示，嚴重膿毒癥的發病率為8.68％(318/3665)，死亡率高達48.7％；患者每天的住院費用約為4016元，平均住院費用為91120元。因此，嚴重膿毒癥不僅是患者死亡的高危因素，而且給個人和國家的帶來了沉重的醫療負擔。

近年來，雖已建立和統一了膿毒癥臨床診斷標準，并在病因、病理生理與治療策略上都取得了一定的成果，但膿毒癥的發病率和死亡率仍居高不下。我們分析其原因有以下幾點：1) 膿毒癥疾病本身的復雜性，雖然感染是膿毒癥的重要誘因，但并不是所有的膿毒癥患者能分離鑒定到病原菌，不能及時對膿毒癥進行識別。2)嚴重膿毒癥的診斷標準復雜，且多項指標需動態觀察具有主觀性，包括全身情況、血流動力學水平、組織灌注參數、實驗室炎癥指標及器官功能障礙參數等5大類20項標準。3)臨床中缺乏早期干預的預警標志物。對于膿毒癥病情進展規律尚未闡明，其變化并不依賴致病菌和毒素，而取決于機體的反應性，其反應機制一旦啟動遵循自身規律發展，病情難以控制。近期研究結果顯示，對膿毒癥發展為更為嚴重的嚴重膿毒癥、膿毒癥休克進行早期識別，早期采取抗生素等措施，能顯著降低膿毒癥休克患者的死亡率。臨床工作經驗也提示，在嚴重膿毒癥發病2小時內對疾病進行診斷，及時給與臨床干預，患者生存率顯著提高。因此，嚴重膿毒癥的治療重在及時，應用可靠的分子標志物進行篩查、簡化流程、節省時間，從發熱和具有全身炎癥反應的患者中預警將會進展為嚴重膿毒癥的患者，對其進行早期臨床治療，具有重要的臨床價值。

目前，膿毒癥及嚴重膿毒癥的基礎研究雖已深入到生物化學、細胞生理學及基因水平，但其診斷仍然主要依賴于臨床癥狀和幾個經典的實驗室檢測標志物。IL-6、IL-8及TNF-α參與嚴重膿毒癥中病情發展，C反應蛋白是監測膿毒癥的“經典”指標，但均缺乏特異性；越來越多的研究認為降鈣素原(procalcitonin，PCT)是目前評價嚴重膿毒癥嚴重程度及不良預后的最好指標，其敏感性和特異性均高于CRP、IL-6、IL-8及TNF-α。然而，臨床應用中PCT 仍無法滿足嚴重膿毒癥的早期預警。最新的Meta分析結果也顯示，與標準的抗生素治療相比， PCT是進行短期持續的抗生素治療的有效監測指標，但以PCT為指導的治療最終對患者的死亡率沒有改善。因此，PCT仍不是預測嚴重膿毒癥病情的進展的早期事件，不能及時的預警嚴重膿毒癥的發生，不能為臨床早期干預提供參考依據，無法最終降低死亡率。臨床中仍缺少有效的嚴重膿毒癥早期預警的標志物。我們前期研究結果顯示，肝素結合蛋白對急診嚴重膿毒癥/膿毒癥休克患者的預警有一定的臨床價值。然而，嚴重膿毒癥患者作為復雜疾病，其標志物應為多個或一組蛋白質，而非單一蛋白質，臨床研究中需要適當的方法進行機制研究。

發明內容