[發明專利]表皮葡萄球菌在合成異丁酸中的應用

在審

• 申請號: 201811266841.1
• 申請日: 2018-10-29
• 公開（公告）號: CN109295114A
• 公開（公告）日: 2019-02-01
• 發明（設計）人: 張國霞;方舒婷;吳繼國;葉菊風;任悄悄;吳鎮東
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學
• 主分類號: C12P7/40
• 分類號: C12P7/40;C12R1/44
• 代理公司: 廣州市天河廬陽專利事務所(普通合伙) 44244
• 代理人: 胡濟元

1.表皮葡萄球菌在合成異丁酸中的應用，其中所述的表皮葡萄球菌保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，其保藏號為GDMCC No：60458。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的表皮葡萄球菌的培養方法如下：

取健康人的糞便加入PBS溶液溶解并使得糞便在溶液中的濃度為10g/L，靜置，取上清液2ml，加入100mlECY液體培養基，在37℃條件下密閉厭氧靜止培養，觀察到有明顯的渾濁后轉至ECY固體培養基中繼續培養1天，挑取快速生長的菌落在所述ECY固體培養基上進行純化，得到單菌落，即所述表皮葡萄球菌菌株；將得到的菌株保存在體積濃度為15％的甘油水溶液中，備用；其中，

所述的ECY固體培養基常溫下每1000ml由以下原料組成：

水蘇糖2.4-4.4g，胰酪胨5.8-7.8g，酵母粉3.2-5.2g，氯化鈉3.7-5.3g，KH₂PO₄ 0.5-0.7g，MgSO₄·7H₂O 3.0-4.5g，無水乙醇3.8-4.0ml，瓊脂粉15.3g-19.6g，其余為蒸餾水；

所述ECY固體培養基的pH值為6.1～7.5；

所述的ECY液體培養基每1000ml由以下原料組成：

水蘇糖2.4-4.4g，胰酪胨5.8-7.8g，酵母粉3.2-5.2g，氯化鈉3.7-5.3g，KH₂PO₄ 0.5-0.7g，MgSO₄·7H₂O 3.0-4.5g，無水乙醇3.8-4.0ml，其余為蒸餾水；

所述ECY液體培養基的pH值為7.2±0.1。

3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的異丁酸的合成方法如下：

吸取上述保存有表皮葡萄球菌菌株的甘油水溶液100微升和CFJ液體培養基10ml，在37℃條件下發酵培養8小時；然后，取1ml發酵培養液、0.5ml體積濃度為50％的H₂SO₄和2ml乙醚置于Eppendorf管內離心2min，取上清液移至另一只Eppendorf管內3000r/min 10min，取上清液，0.22μm的濾膜過濾，即得含異丁酸的上清液。

所述的CFJ液體培養基每1000ml由以下原料組成：

玉米粉10.5g，食用級紅糖4.2g，氯化鈉0.12g，氯化鈣0.09g，硫酸鎂0.008g，磷酸氫二鉀0.04g，碳酸氫鈣0.4g，其余為蒸餾水；

所述CFJ液體培養基的pH值為7.2±0.1。