[發(fā)明專利]湖水水樣中鉛離子檢測(cè)方法用探針集成功能核酸修飾電極的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811265189.1
• 申請(qǐng)日: 2016-05-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109060903A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-12-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 申曉萍;王超穎;洪華;張愛(ài)平;施筱迪;王海天;洪昱;王紅衛(wèi)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中華人民共和國(guó)南通出入境檢驗(yàn)檢疫局
• 主分類號(hào): G01N27/26
• 分類號(hào): G01N27/26;G01N27/333;G01N27/327;G01N27/48
• 代理公司: 南通市永通專利事務(wù)所(普通合伙) 32100
• 代理人: 葛雷

本發(fā)明公開(kāi)了一種湖水水樣中鉛離子檢測(cè)方法用探針集成功能核酸修飾電極的制備方法，將金納米粒子修飾電極置于加有1μM巰基修飾的17E DNAzyme的緩沖溶液中自組裝約12小時(shí)；所述緩沖溶液是pH7.5、含140mM NaCl和5mM KCl的20mM Tris?HCl溶液；取出電極用所述緩沖溶液清洗，再將電極置入到加有1mM巰基己醇的上述緩沖溶液中鈍化，用同樣的緩沖溶液清洗除去未組裝的巰基乙醇；最后將電極轉(zhuǎn)移到含有1μM的底物17DS溶液中組裝；所述底物17DS的3’端修飾二茂鐵探針?lè)肿樱辉儆蒙鲜鼍彌_溶液洗滌電極，得到探針集成的功能核酸修飾電極。本發(fā)明選擇性好、靈敏、簡(jiǎn)便、快速。

本申請(qǐng)是申請(qǐng)?zhí)枺?01610372050.1、申請(qǐng)日：2016-05-31、名稱“探針集成的功能核酸修飾電極直接電化學(xué)檢測(cè)鉛離子方法”的分案申請(qǐng)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種探針集成的功能核酸修飾電極直接電化學(xué)檢測(cè)鉛離子方法。

背景技術(shù)

鉛離子是常見(jiàn)的一種有害重金屬離子，其監(jiān)測(cè)/檢測(cè)對(duì)人類健康和環(huán)境監(jiān)測(cè)都有著十分重要的意義。過(guò)去幾十年中，人們已經(jīng)發(fā)展了如原子吸收/發(fā)射光譜、熒光光譜、質(zhì)譜、光子晶體等多種方法對(duì)鉛離子進(jìn)行監(jiān)測(cè)/檢測(cè)。近年來(lái)，美國(guó)陸藝研究小組通過(guò)體外篩選技術(shù)獲得了對(duì)鉛離子敏感的功能核酸17E DNAzyme，他們以17E DNAzyme作為鉛離子識(shí)別元件，用金納米粒子作為傳感元件，開(kāi)發(fā)了比色傳感器檢測(cè)鉛離子(Liu, J.; Lu, Y.,Nature Protocols 2006, 1, 246-252.)。Wang小組基于17E DNAzyme與和雙鏈 DNA 熒光分子螯合染料Picogreen發(fā)展了免標(biāo)記的熒光傳感器檢測(cè)鉛離子(Zhang, L.; Han, B.;Li, T.; Wang, E., Chemical Communications 2011, 47, 3099–3101.)。隨后，Yin小組基于17E DNAzyme發(fā)展了電化學(xué)發(fā)光傳感器檢測(cè)鉛離子(Gao, A.; Tang, C.; He, X.;Yin, X., Analyst, 2013, 138, 263–268)。因此利用鉛離子敏感的功能核酸17E DNAzyme檢測(cè)鉛離子受到了國(guó)內(nèi)外專家的廣泛關(guān)注。

由于熒光檢測(cè)、紫外檢測(cè)以及電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)都需要比較龐大、貴重的檢測(cè)儀器，因此這些方法不適用于一些比較簡(jiǎn)陋的工作場(chǎng)所及野外作業(yè)的場(chǎng)合。電化學(xué)檢測(cè)方法由于具有靈敏度高、操作簡(jiǎn)單快速、成本低、能耗低、易于儀器化等優(yōu)點(diǎn)，因而受到研究人員的日益青睞。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種選擇性好、靈敏、簡(jiǎn)便、快速的探針集成的功能核酸修飾電極直接電化學(xué)檢測(cè)鉛離子方法。

本發(fā)明的技術(shù)解決方案是：

一種探針集成的功能核酸修飾電極直接電化學(xué)檢測(cè)鉛離子方法，其特征是：將探針集成的功能核酸修飾電極浸入加有待測(cè)鉛離子的緩沖液20~30分鐘，取出洗滌并在0.1 M的NaClO₄電解質(zhì)溶液中進(jìn)行DPV測(cè)定，根據(jù)在0.1～0.6V 范圍內(nèi)掃描記錄的DPV峰電流信號(hào)的變化率來(lái)計(jì)算樣品中的鉛離子濃度；所述緩沖液是pH 7.5、含140 mM NaCl和5 mM KCl的20mM Tris-HCl溶液；

所述探針集成的功能核酸修飾電極由以下方法制備得到：將金納米粒子修飾電極置于加有1 μM巰基修飾的17E DNAzyme的緩沖溶液中自組裝10~18小時(shí)；所述緩沖液是pH 7.5、含140 mM NaCl和5 mM KCl的20 mM Tris-HCl溶液；取出電極用所述緩沖溶液清洗，再將電極置入到加有1mM巰基己醇的上述緩沖溶液中鈍化1-3小時(shí)，用同樣的緩沖溶液清洗除去未組裝的巰基乙醇；最后將電極轉(zhuǎn)移到含有1 μM的底物17DS溶液中組裝10~18小時(shí)；所述底物17DS的3’端修飾二茂鐵探針?lè)肿樱辉儆蒙鲜鼍彌_溶液洗滌電極2-3次，得到探針集成的功能核酸修飾電極。

探針集成的功能核酸修飾電極浸入加有待測(cè)鉛離子的緩沖液25分鐘。