[發(fā)明專利]胱抑素C測定試劑盒及其制備方法和檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811260548.4
• 申請日: 2018-10-26
• 公開（公告）號: CN109358009B
• 公開（公告）日: 2021-08-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李海軍;陶成剛;李建奎;黃鍇;陳肯;李小玉
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢百德瑞康生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 武漢藍(lán)寶石專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 42242
• 代理人: 廉海濤

本發(fā)明涉及一種胱抑素C測定試劑盒及其制備方法和檢測方法，該胱抑素C測定試劑盒包括試劑R1和試劑R2，試劑R1為由以下濃度的各組分制備而成的水溶液：甘氨酸7.3～7.7g/L、聚乙二醇18.0～22.0g/L、生物防腐劑0.8～1.2mL/L以及氫氧化鈉，聚乙二醇的分子量范圍為5000～8000；試劑R2為由以下濃度的各組分制備而成的水溶液：甘氨酸7.3～7.7g/L、保護(hù)劑1.8～2.2g/L、生物防腐劑0.8～1.2mL/L、抗人Cys?C抗體膠乳顆粒147.0～153.0mL/L以及氫氧化鈉。該胱抑素C測定試劑盒通過篩選包含特定配比的各組分分別形成試劑R1和試劑R2，使得對血清中Cys?C的檢測下限達(dá)0.2mg/L，靈敏度高，整體的線性范圍可達(dá)10.0mg/L，精密度高，對血清中其他成分的干擾能力強(qiáng)，特異性好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種胱抑素C測定試劑盒及其制備方法和檢測方法。

背景技術(shù)

胱抑素C(CystatinC，Cys-C)又稱半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白C，是一種由122個氨基酸組成、帶正電荷(等電點(diǎn)為9.3)的低分子量蛋白質(zhì)，能夠自由通過腎小球?yàn)V過膜。人機(jī)體所有的有核細(xì)胞均以恒定的速率產(chǎn)生Cys-C，其在血清中的濃度與腎小球的濾過率(GFR)密切相關(guān)。在腎功能不全、肝硬化、腫瘤等多種疾病的診斷中，能夠很好的替代血清肌酐、肌酐消除率，成為一種新的可反映GFR的理想標(biāo)志物。

胱抑素C是一種分泌性蛋白質(zhì)，廣泛存在于各種體液中，如腦脊液、血液、尿液、唾液、精漿等。在人體的腦脊液及精漿中濃度較高，尿液中的濃度最低。正常血漿Cys-C濃度為1.0mg/L，Cys-C在羊水中的濃度與血漿濃度相近，腦脊液Cys-C達(dá)5.8mg/L，比正常血漿水平高5-6倍；在精漿中濃度最高，平均51mg/L；平均尿濃度:血漿濃度為0.1:0.8mg/L。

在臨床上，胱抑素C在腎功能和甲狀腺等的檢測中的應(yīng)用越來越廣泛。隨著Cys-C在臨床上的應(yīng)用，檢測血清胱抑素C的方法也越來越多，按原理大體分為以下兩種：

(1)非均相法，例如單向免疫擴(kuò)散法(RID)、放射免疫測定法(RIA)、熒光免疫檢測法(FIA)、酶聯(lián)免疫測定法(ELISA)等；

(2)均相法，例如顆粒計(jì)數(shù)免疫測定法、顆粒增強(qiáng)透射免疫比濁法(PETIA)、顆粒增強(qiáng)散射免疫比濁法(PENIT)等。

由于血清中胱抑素C濃度較低，故其測定方法需較高的分析靈敏度及特異性。Lofberg等首先用單向免疫擴(kuò)散法及酶免疫測定法對胱抑素C含量進(jìn)行測定，然而這兩種方法不僅費(fèi)時，而且檢測限也差(分別為300ug/L和30ug/L)。隨后出現(xiàn)較為簡單且更靈敏的放射、熒光及各種酶免疫測定的方法報道，檢測限有所降低，但是測定時間仍較長，無法常規(guī)應(yīng)用，更無法用于急診測定。也就是采用非均相測定方法，很難實(shí)現(xiàn)自動化。而采用均顆粒增強(qiáng)透射免疫比濁法(PETIA)和顆粒增強(qiáng)散射免疫比濁法(PENIT)的靈敏度和特異性相對較高，但仍然受血清中的膽紅素、血紅蛋白、乳糜等組分的較大影響。

發(fā)明內(nèi)容

基于此，有必要針對提供一種靈敏度高的胱抑素C測定試劑盒及其制備方法和檢測方法。

一種胱抑素C測定試劑盒，包括試劑R1和試劑R2，所述試劑R1為由以下濃度的各組分制備而成的水溶液：

其中，所述聚乙二醇的分子量范圍為5000～8000；

所述試劑R2為由以下濃度的各組分制備而成的水溶液：

在其中一個實(shí)施例中，所述試劑R1為由以下濃度的各組分制備而成的水溶液：

所述試劑R2為由以下濃度的各組分制備而成的水溶液：