[發明專利]表達PD-1結合蛋白的溶瘤病毒及其應用

在審

• 申請號: 201811259785.9
• 申請日: 2018-10-26
• 公開（公告）號: CN111100846A
• 公開（公告）日: 2020-05-05
• 發明（設計）人: 章康健;方先龍;顧錦法;劉新垣
• 申請（專利權）人: 上海元宋生物技術有限公司
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;A61K35/761;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 彭鯤鵬;高巍

本發明公開了一種表達PD?1結合蛋白的溶瘤病毒，特別公開了一種包含表達PD?1單鏈抗體的融合蛋白的溶瘤腺病毒，該溶瘤病毒能夠在體外和體內高效抑制腫瘤。

技術領域

本發明屬于利用溶瘤病毒進行腫瘤治療的技術領域，具體地，本發明涉及一種表達PD-1結合蛋白的溶瘤腺病毒、其制備方法以及應用。

背景技術

據統計，全世界每年有超過1200萬人診斷出癌癥，癌癥嚴重影響著全人類的健康和發展。受醫療和環境條件的影響，中國癌癥死亡率高于全球平均水平。傳統的腫瘤療法存在療效差、死亡率高及預后復發率高等缺點，因此對癌癥的治療提出了重大挑戰。例如早在腫瘤發展的極早期，微轉移就已經產生從而定位于遠離腫瘤原發部位的組織中。因此在診斷發現癌癥時，許多癌癥患者已出現了微轉移的現象。

腫瘤反應性T細胞可以尋找并破壞這些微轉移，并使周圍的健康組織得以保留。然而，天然存在的針對惡性腫瘤的T細胞應答通常不足以有效抑制原發性或轉移性腫瘤的消退。新的療法例如免疫療法包括PD-1 抗體、PD-L1抗體、以及近年來熱門的CAR-T技術，就旨在于加強病人對腫瘤的免疫反應而清除原發性或轉移性腫瘤細胞。此外，作為另一個具有前途的療法，溶瘤病毒能夠在腫瘤細胞中復制并裂解細胞，從而持續殺死腫瘤細胞。而且溶瘤病毒中還能夠攜帶抗癌基因等，在利用病毒裂解細胞的同時，發揮基因殺傷腫瘤細胞的能力，從而提高了治療效果。

目前仍然急需獲得新的手段增強溶瘤病毒的效力，從而增加臨床上獲得成功的機會。

發明內容

本發明首先通過改進溶瘤腺病毒的結構，將病毒基因組中的E1A野生型啟動子替換為survivin啟動子，使得改造后的溶瘤腺病毒僅在具有 survivin啟動子活性的腫瘤細胞中復制而在正常細胞中無法復制，加強了對腫瘤細胞的靶向性；隨后失活E1B基因，從而使腺病毒優先在p53功能缺失的癌細胞中復制。進一步，在病毒的基因組中引入外源的PD-1結合蛋白序列，從而使得溶瘤病毒在發揮自身溶瘤特性的同時，還額外具有抑制PD-1后所產生的免疫調節效果。更重要的是，發明人意外發現，所述PD-1結合蛋白的結構會對溶瘤病毒的效果產生至關重要的影響，通過引入特定形式的PD-1單鏈抗體并且在C端連接免疫球蛋白的Fc序列，能夠對溶瘤病毒的體內和體外的抑瘤效果帶來預料不到的改善。基于上述發現，完成了本發明。

具體地，本發明的第一個方面提供了一種溶瘤病毒，其包含編碼能夠抑制PD-1活性的PD-1結合蛋白的核酸序列。

在一個實施方案中，所述病毒是腺病毒。

在另一個實施方案中，所述病毒包含以survivin啟動子驅動的E1A 基因，優選地，病毒基因組中E1A的內源啟動子被survivin啟動子所替換；和/或

在另一個實施方案中，E1B基因的活性降低或者完全失活，優選地，從病毒基因組中敲除E1B基因。

在另一個實施方案中，所述PD-1結合蛋白為包含PD-1單鏈抗體和免疫球蛋白Fc區的融合多肽。

在另一個實施方案中，所述融合多肽具有以下結構：

S-V_L-L-V_H-Fc；

其中，S為任選存在的信號肽序列，優選地，所述信號肽序列為：

MDMRVPAQLLGLLLLWLPGARC(SEQ ID NO：14)；或者

MDMRVPAQLLGLLLLWFPGSRC(SEQ ID NO：16)；