[發明專利]表達PD-1結合蛋白的溶瘤病毒及其應用

在審

• 申請號: 201811259785.9
• 申請日: 2018-10-26
• 公開（公告）號: CN111100846A
• 公開（公告）日: 2020-05-05
• 發明（設計）人: 章康健;方先龍;顧錦法;劉新垣
• 申請（專利權）人: 上海元宋生物技術有限公司
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;A61K35/761;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 彭鯤鵬;高巍

1.一種溶瘤病毒，其包含編碼能夠抑制PD-1活性的PD-1結合蛋白的核酸序列。

2.根據權利要求1所述的溶瘤病毒，其中所述病毒是腺病毒。

3.根據權利要求1或2所述的溶瘤病毒，其中所述病毒包含以survivin啟動子驅動的E1A基因，優選病毒基因組中E1A的內源啟動子被survivin啟動子所替換；和/或

E1B基因的活性降低或者完全失活，例如從病毒基因組中敲除E1B基因。

4.根據權利要求1至3中任一項所述的溶瘤病毒，其中所述PD-1結合蛋白為包含PD-1單鏈抗體和免疫球蛋白Fc區段的融合多肽。

5.根據權利要求4所述的溶瘤病毒，其中所述融合多肽具有以下結構：

S-V_L-L-V_H-Fc；

其中，S為任選存在的信號肽序列，優選地，所述信號肽序列為：

MDMRVPAQLLGLLLLWLPGARC(SEQ ID NO：14)；或者

MDMRVPAQLLGLLLLWFPGSRC(SEQ ID NO：16)；

V_L為PD-1單鏈抗體的輕鏈可變區，優選地，其包含序列為RAGQNVQNYLA(SEQ ID NO：17)的CDR1、序列為NAQSLQT(SEQ ID NO：18)的CDR2以及序列為QQYNSWPT(SEQ ID NO：19)的CDR3，更優選的，所述輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示；

L為連接序列，例如包含或主要由Ala(A)、Thr(T)、Gly(G)和/或Ser(S)構成的柔性連接序列，具體地比如一段包含或主要由Gly和Ser構成的柔性連接序列；例如，所述連接序列的長度可以為1-50個氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50；優選地，L為(Gly₄Ser)_m，其中m為1至10之間的自然數，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，更優選的，L為(Gly₄Ser)₆；或者

L為A(EAAAK)_nA，其中n為1至9之間的自然數，例如1、2、3、4、5、6、7、8或9；

V_H為PD-1單鏈抗體的重鏈可變區，優選的，其包含序列為GFSLSTSGT(SEQ ID NO：20)的CDR1、序列為CWEDS(SEQ ID NO：21)的CDR2以及序列為EDSGYFWFPY(SEQ ID NO：22)的CDR3，更優選的，其氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；

Fc是免疫球蛋白的Fc區；所述Fc可以來自人免疫球蛋白；所述Fc區可以是來自IgG、IgA、IgD、IgE或IgM的Fc區；優選地，所述Fc區是來自IgG的Fc區，例如來自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的Fc區；再優選地，所述Fc區是來自IgG4的Fc區；其中與其來源序列相比，所述Fc區可以帶有一個或更多個替換、添加和/或缺失；優選的Fc序列如SEQ ID NO：9所示。

6.根據權利要求1至5中任一項所述的溶瘤病毒，其中所述核酸序列與啟動子可操作連接，優選的，所述啟動子為CMV啟動子。

7.根據權利要求1至6中任一項所述的溶瘤病毒，其中所述溶瘤病毒于2018年08月21日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO：V201853。

8.權利要求1至7中任一項所述的溶瘤病毒在制備治療增生性疾病的藥物中的用途，優選的，所述增生性疾病是腫瘤，例如前列腺癌、乳腺癌、結直腸癌、肺癌、肝癌、黑色素瘤、頭頸部腫瘤、淋巴癌、胃癌、食管癌、卵巢癌、頭頸部鱗癌、膀胱癌或者腎癌。