[發明專利]一種乳酸菌分離培養基及其制備方法及乳酸菌篩選方法

有效

• 申請號: 201811259118.0
• 申請日: 2018-10-26
• 公開（公告）號: CN109337836B
• 公開（公告）日: 2021-11-26
• 發明（設計）人: 楊玉波;楊帆;袁頡;張巧玲;吳耀領;王和玉;王莉;白逢彥;韓培杰;劉延峰
• 申請（專利權）人: 貴州茅臺酒股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C12N1/16
• 代理公司: 北京市萬慧達律師事務所 11111
• 代理人: 謝敏楠

本發明涉及白酒釀造技術領域的一種乳酸菌分離培養基，尤其涉及一種酒醅中乳酸菌分離培養基及其制備方法及乳酸菌篩選方法。公開了一種酒醅中乳酸菌分離培養基，所述培養基的配方中包含了大曲?酒醅浸提液25～100mL/L。通過對培養基中大曲?酒醅浸提液進行離心處理，能克服培養基背景色加深，雜質多的缺點，制作的培養平板能夠用高通量篩選技術進行菌落識別與篩選，能同時滿足酒醅中乳酸菌生長分離及高通量篩選的要求。與人工手動挑選相比，能顯著提高工作效率。

技術領域

本發明涉及白酒釀造技術領域的一種乳酸菌分離培養基，尤其涉及一種酒醅中乳酸菌分離培養基及其制備方法及乳酸菌篩選方法。

背景技術

白酒生產是開放式固態發酵過程，酒醅微生物群落組成十分復雜。經釀造活動的長期馴化，酒醅中的微生物在酒醅高酸、營養物質多樣的環境中得以更好地生長和代謝。

乳酸菌是能夠發酵糖類物質產生乳酸的一類微生物的總稱，普遍存在于白酒發酵過程中，對白酒品質具有重要的影響，深入研究不同類型乳酸菌的產酸代謝機理對釀酒技術研究具有重要意義。

目前常見的乳酸菌分離方法為MRS基礎培養基直接分離，固態發酵過程中的乳酸菌經過長期的馴化，更適宜在酒醅環境中生長，因此對于固態發酵酒醅中乳酸菌的分離而言，普通的MRS分離培養基選擇性低，缺乏酒醅乳酸菌生長所需的一些微量物質。因此可分離乳酸菌種類及數量較少，且分離效果易受酵母等微生物的干擾。

由于菌落較小，因采用高通量篩選技術進行乳酸菌分離時還需盡可能消除背景干擾，減少培養基雜質及背景顏色對儀菌落識別的影響。

迄今為止，關于醬香型酒醅中乳酸菌的分離和篩選，尚未有在培養基中添加大曲-酒醅浸提液，且未結合高通量篩選技術對乳酸菌進行分離和篩選的報道。

發明內容

本發明的目的之一在于提供一種乳酸菌分離培養基。

本發明的進一步目的在于提供一種能夠用于高通量篩選的乳酸菌分離培養基。

本發明的進一步目的在于提供一種上述培養基中所含大曲-酒醅浸提液的制備方法。

本發明的進一步目的在于提供一種上述培養基的制備方法。

在培養基中添加大曲-酒醅浸提液，能更好的模擬釀造微生物生長環境，促進酒醅微生物的分離。據報道，在對濃香型酒醅中細菌進行分離時，研究者曾嘗試將出窖酒醅與煮沸過的蒸餾水振蕩制備成浸提液，添加在不同的細菌培養基中，但是分離效果不突出。該浸提液未添加生產用大曲，且未進行高溫煮沸。

高通量篩選技術是一種通過儀器成像快速識別和挑選微生物單菌落技術。在白酒微生物研究中引入高通量篩選技術，與人工手動挑選相比，能顯著提高工作效率。但是，為了保證儀器能有效識別平板中的單菌落，進行高通量篩選的平板應滿足培養基背景顏色不能太深、無太多雜質干擾等要求。因大曲-酒醅浸提液成分復雜，色素含量較高，直接添加大曲-酒醅浸提液會加深培養基背景色，且帶入較多雜質。因此，為同時滿足酒醅中乳酸菌分離及高通量篩選的要求，需對大曲-酒醅浸提液的制備方法及用量進行進一步優化。

為解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案內容具體如下：

一種用于分離酒醅中乳酸菌的培養基，所述培養基的配方包括如下組分：蛋白胨(8-12g/L)、牛肉膏(6.4-9.6g/L)、酵母粉(3.2-4.8g/L)、葡萄糖(16-24g/L)、磷酸氫二鉀(1.6-2.4g/L)、檸檬酸氫二銨(1.6-2.4g/L)、乙酸鈉(4-6g/L)、硫酸鎂(0.16-0.24g/L)、硫酸錳(0.034-0.048g/L)、瓊脂(10-20g/L)、吐溫(0.8-1.2g/L)、大曲-酒醅浸提液25.0～100.0 mL/L，其中溶劑為水；