[發明專利]一種用于治療兒童矮小癥的重組人血清白蛋白/生長激素融合蛋白的制備純化方法

有效

• 申請號: 201811258235.5
• 申請日: 2018-10-26
• 公開（公告）號: CN109851674B
• 公開（公告）日: 2022-02-15
• 發明（設計）人: 侯瓊;楊小楠;陳穎;富巖;于在林
• 申請（專利權）人: 天津林達生物科技有限公司;天津溥瀛生物技術有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/81;C12N1/19;C07K1/22;C07K1/20;C07K1/18;C07K1/16;A61K38/27;A61K47/42;A61P5/06;C12R1/84
• 代理公司: 天津市尚儀知識產權代理事務所(普通合伙) 12217
• 代理人: 王山

本發明公開了一種重組人血清白蛋白/生長激素融合蛋白、該重組融合蛋白制備純化方法、以及該重組融合蛋白在制備治療兒童矮小癥藥物中的用途。所述重組人血清白蛋白/生長激素融合蛋白的氨基酸序列為SEQ ID NO.1，核酸序列為SEQ ID NO.2。本發明的制備工藝通過構建表達酵母工程菌從而獲得高密度表達重組融合蛋白，并且通過純化工藝，獲得了可供臨床上使用的重組人血清白蛋白/生長激素融合蛋白。通過本發明制備純化方法獲得的重組人血清白蛋白/生長激素融合蛋白是一種用于兒童矮小癥治療的創新藥物結構，其達到具有可兩周給藥一次的長效性，更適合兒童用藥的要求，并具有更優的療效、更少的給藥頻次、更低的生產成本。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，更具體地是一種用于治療兒童矮小癥的重組人血清白蛋白/生長激素融合蛋白及其制備純化方法和其在制備治療兒童矮小癥藥物中的用途。

背景技術

人血清白蛋白（HSA）是一種可溶性單體蛋白質，構成血液中蛋白總量的一半。白蛋白作為一種基本載體，攜帶傳遞脂肪酸、類固醇和激素分子等，其穩定的惰性性質是維持血壓的一個重要因素。血清白蛋白是一種球狀非糖基化的、分子量為65千道爾頓、具有585個氨基酸的血清蛋白質。這一蛋白（白蛋白前體）再通過高爾基體的轉化加工，去除引導多肽，而分泌到細胞外。血清白蛋白有35個半胱氨酸，在血液中，白蛋白是一個有17個二硫鍵的單體（參見Brown JR,“白蛋白的結構、功能和應用”Pergamon,紐約，1977）。當沒有分泌多肽時，在酵母細胞內的白蛋白產物是錯配狀態，將失去90%的抗原性（與血漿中自然狀態白蛋白相比），并且形成不溶性的白蛋白聚合體，不具有白蛋白的生物活性。現在用于臨床的白蛋白均是從人血漿中提取的。利用微生物重組表達白蛋白（rHSA）的生產已在專利EP330451、EP361991和于在林、富巖中國授權專利ZL2004010057313.7中公開。

白蛋白是血液中的主要成分，在人體內含量為每升血液含40克，其半衰期壽命為14-20天。在藥物制劑組成中，白蛋白也常被用作藥物的穩定劑，尤其是生物藥和疫苗的制造。綜上所述，利用基因工程技術，將人血清白蛋白與治療性蛋白質基因融合在酵母菌或脊椎動物細胞中表達為重組融合蛋白后，該融合蛋白將具有極大的優勢使之可抵御生物體內酶解作用，并可使治療性蛋白質在體內體外的壽命大大提高，也就是可增加治療性蛋白質在血清中和儲存時的穩定性和較長的半衰期，達到蛋白藥物的長效化，大大減少給藥頻率,在重大疾病臨床治療中獲得更好的治療效果。

人生長激素(human growth hormone, hGH) 是人腦垂體前葉分泌的一種蛋白質激素. 它不僅有促進生長的作用, 而且與機體的合成代謝密切相關, 是治療侏儒癥、燒傷、創傷、骨折、出血性潰瘍的重要藥物。由于其體內半衰期僅為0.5～2hr左右，故需要每天、長期注射（數年，5-10年）給藥才能發揮療效，治療周期長更需要藥物長效化。為此，市場急需長效化、特別是適合于兒童的長效藥。基因重組的長效重組人血清白蛋白/生長激素融合蛋白是具有與人體內源生長激素同等的作用，刺激骨骺端軟骨細胞分化、增殖，刺激軟骨基質細胞增長，刺激成骨細胞分化、增殖，引起線形生長加速及骨骼變寬。促進全身蛋白質合成，糾正手術等創傷后的負氮平衡狀態，糾正重度感染及肝硬化等所致的低蛋白血癥；刺激免疫球蛋白合成，刺激淋巴樣組織，巨噬細胞和淋巴細胞的增殖，增強抗感染能力；刺激燒傷創面及手術切口膠原體細胞合成纖維細胞，巨噬細胞分裂增殖，加速傷口愈合，促進心肌蛋白合成，增加心肌收縮力，降低心肌耗氧量，調節脂肪代謝，降低血清膽固醇、低密度脂蛋白的水平；補充生長激素不足或缺乏，調節成人的脂肪代謝、骨代謝、心腎功能。

臨床上可用于治療如下主要適應癥。

1、用于因內源性生長激素缺乏所引起的兒童生長緩慢； 2、用于重度燒傷治療；3、用于已明確的下丘腦-垂體疾病所致的生長激素缺乏癥和經兩種不同的生長激素刺激試驗確診的生長激素顯著缺乏。