[發明專利]一種HPLC-QQQ/MS法測定龍生蛭膠囊中有效成分的含量檢測方法

有效

• 申請號: 201811257744.6
• 申請日: 2018-10-26
• 公開（公告）號: CN109307721B
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發明（設計）人: 王偉;肖紅斌;趙步長;魏紫奕;趙濤;徐文娟;王益民
• 申請（專利權）人: 陜西步長制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 西安億諾專利代理有限公司 61220
• 代理人: 張建

本發明提供一種HPLC?QQQ/MS法測定龍生蛭膠囊中有效成分的含量檢測方法，其中色譜條件為：色譜柱以十八烷基鍵合硅膠柱為填充劑，以0.1％甲酸?水為流動相A，以0.1％甲酸?乙腈為流動相B，其體積配比為流動相A相：流動相B相為：80～0％：20～100％，進行梯度洗脫；該方法可以測定龍生蛭膠囊中黃芪甲苷、羥基紅花黃色素A、毛蕊異黃酮葡糖苷、毛蕊異黃酮、阿魏酸、紫丁香苷、正丁基苯酞、藁本內酯、洋川芎內酯A、洋川芎內酯I、洋川芎內酯H、川芎嗪、異秦皮啶、去氫木香內酯、苦杏仁苷、刺五加苷E、芍藥苷、氧化芍藥苷、苯甲酰芍藥苷等中藥有效物質成分。該含量檢測方法具有操作方法簡單，靈敏度高，含量準確的優點。

技術領域

本發明涉及屬于中成藥化學分析檢測領域，尤其涉及一種HPLC-QQQ/MS法測定龍生蛭 膠囊中有效成分的含量檢測方法。

背景技術

龍生蛭膠囊是由陜西步長制藥有限公司獨家生產，該藥物是由黃芪、水蛭、川芎、當歸、 桃仁、紅花、赤芍、木香、石菖蒲、地龍、桑寄生和刺五加12味中藥組成的復方制劑，具有 補氣活血、逐瘀通絡的功效。上市前臨床研究表明，龍生蛭膠囊對腦梗塞總有效率可達91.7％， 并且對中風后遺癥常見的中醫證候改善率均在80％以上。上市后廣泛應用于腦梗死恢復期的 治療，在西藥治療基礎上應用龍生蛭膠囊或者聯合其他中藥應用均取得卓越效果，如聯合應 用龍生蛭和阿司匹林治療短暫性腦缺血發作療效確切，可減少其病情的復發率和病情發展為 腦卒中的風險；在西醫治療基礎上加用龍生蛭膠囊治療急性腦梗死具有明顯的改善作用。

目前對龍生蛭膠囊的臨床研究相對較多，臨床效果顯著，但是其化學成分研究尚未報道， 其物質基礎尚不明確，因此對龍生蛭膠囊化學成分進行含量測定能夠有效對復方制劑進行質 量控制，無論是保證用藥的安全性和有效性，還是準確全面評價藥材質量都是非常必要且有 意義的。目前文獻報道僅以黃芪甲苷作為龍生蛭膠囊的質控指標，而中藥的藥理藥效是多種 有效成分協同作用的結果，制劑的質量評定應是多種成分的考察，僅通過測定單一或幾個指 標不能較為全面的反映中藥質量，多組分活性成分定量分析是中藥質量控制最直接和必要的 方法。此外高效液相色譜-三重串聯四級桿質譜法具有快速、靈敏度高的特點，質譜多反應監 測掃描模式依據化合物母離子和子離子的質荷比信息進行定量，能夠提高檢測靈敏度和定量 準確性，是解決多組分化學成分定量的有力工具。因此，迫切需要一種簡便、高效、準確、 成本低的質量檢測方法能同時定性和定量測定龍生蛭膠囊中多個有效組分。

發明內容

本發明的目的是提供一種HPLC-QQQ/MS法測定龍生蛭膠囊中有效成分的含量檢測方 法，該檢測方法對龍生蛭膠囊中黃芪、川芎等藥材的19種有效成分，采用多反應監測模式對 3批市售龍生蛭膠囊進行成分含量測定，對龍生蛭中的有效物質成分含量進行檢測分析，以 期為龍生蛭膠囊的質量控制和評價其內在品質提供科學依據。

本發明所述的龍生蛭膠囊，均是指由陜西步長制藥有限公司生產，其該藥物由黃芪225 份、水蛭100份、川芎90份、當歸90份、紅花90份、桃仁113份、赤芍90份、木香90 份、石菖蒲90份、地龍60份、桑寄生90份、刺五加浸膏35份制備而成。

本發明提供的一種HPLC-QQQ/MS法測定龍生蛭膠囊中有效成分的含量檢測方法，所述 含量檢測方法包括如下步驟：

⑴、供試品溶液的制備：取龍生蛭膠囊內容物，研細混勻，加入60～80％甲醇，超聲處 理20～40min，放冷后用甲醇補充損失的重量，搖勻取上清液，濾過，用時稀釋測定，并精密稱取吲哚美辛和異鼠李素對照品，加40～60％甲醇溶液，溶解并搖勻，配置成質量濃度為1～8μg/mL的內標溶液，即得；

⑵、對照品標準液的制備：分別精密稱取，芍藥苷、芒柄花苷、刺五加苷E、羥基紅花黃色素A、毛蕊異黃酮苷、藁本內酯、洋川芎內酯I、異嗪皮啶、苦杏仁苷、氧化芍藥苷、苯 甲酰芍藥苷、黃芪甲苷、阿魏酸、紫丁香苷、洋川芎內酯H、去氫木香內酯，毛蕊異黃酮、 正丁基苯肽、洋川芎內酯A，川芎嗪對照品適量，加入40～60％甲醇進行溶解，配制混合對 照品溶液；