[發(fā)明專利]一種HPLC-QQQ/MS法測定龍生蛭膠囊中有效成分的含量檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811257744.6
• 申請日: 2018-10-26
• 公開（公告）號: CN109307721B
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發(fā)明（設計）人: 王偉;肖紅斌;趙步長;魏紫奕;趙濤;徐文娟;王益民
• 申請（專利權）人: 陜西步長制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 西安億諾專利代理有限公司 61220
• 代理人: 張建

1.一種HPLC-QQQ/MS法測定龍生蛭膠囊中有效成分的含量檢測方法，其特征在于，所述含量檢測方法包括如下步驟：

⑴、供試品溶液的制備：取龍生蛭膠囊內容物，研細混勻，加入60～80%甲醇，超聲處理20～40min，放冷后用甲醇補充損失的重量，搖勻取上清液，濾過，用時稀釋測定，并精密稱取吲哚美辛和異鼠李素對照品，加40～60%甲醇溶液，溶解并搖勻，配制成質量濃度為1～8μg/mL的內標溶液，即得；

⑵、對照品標準液的制備：分別精密稱取，芍藥苷、刺五加苷E、羥基紅花黃色素A、毛蕊異黃酮苷、藁本內酯、洋川芎內酯I、異嗪皮啶、苦杏仁苷、氧化芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、黃芪甲苷、阿魏酸、紫丁香苷、洋川芎內酯H、去氫木香內酯，毛蕊異黃酮、正丁基苯肽、洋川芎內酯A，川芎嗪對照品適量，加入40～60%甲醇進行溶解，配制混合對照品溶液；

⑶、色譜條件：色譜柱以十八烷基鍵合硅膠柱為填充劑，流動相為A-0.1%甲酸-水，B-0.1%甲酸-乙腈，正離子模式梯度洗脫0-1.5 min，20% B；1.5-3 min，20%-80% B；3-4 min，80% B；4-6min，80%-100% B，負離子模式梯度洗脫0-0.5 min，20% B；0.5-1 min，20%-100%B；1-3 min，100% B，進行梯度洗脫；每次進樣預平衡2～10min，流速為0.1～0.8mL/min，進樣量2～6；

⑷、質譜條件：電噴霧離子源AJS-ESI，采用多反應監(jiān)測模式，干燥氣溫度340～360℃，干燥氣流速8～10L/min，噴嘴電壓42～48psi，鞘氣溫度230～270 ℃，鞘氣流速9～13L/min，正、負離子分別掃描模式，正離子模式下內標為吲哚美辛，負離子模式下內標為異鼠李素為內標；

⑸、色譜峰測定：將上述步驟⑴和⑵所制得的供試品溶液和混合對照品溶液，按照上述步驟⑶的色譜條件和步驟⑷的質譜條件，測定供試品溶液，得到龍生蛭膠囊有效成分的離子流色譜圖，即得。

2.根據權利要求1所述含量檢測方法，其特征在于，所述步驟⑴供試品溶液制備方法中，取龍生蛭膠囊內容物，研細混勻，加入70%甲醇，超聲處理20～40min，放冷后用70%甲醇補充損失的重量，搖勻取上清液，濾過，用時稀釋測定。

3.根據權利要求1所述含量檢測方法，其特征在于，所述步驟⑵對照品標準液的制備中，分別精密稱取各待測對照品，所述芍藥苷稀釋濃度為0.004～3μg/mL，刺五加苷E、羥基紅花黃色素A、毛蕊異黃酮苷、藁本內酯、洋川芎內酯I、異嗪皮啶、苦杏仁苷稀釋濃度為1μg/mL，氧化芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、黃芪甲苷、阿魏酸、紫丁香苷、洋川芎內酯H、去氫木香內酯稀釋濃度為0.1～0.5μg/mL，毛蕊異黃酮、正丁基苯肽、洋川芎內酯A稀釋濃度為0.01～0.5μg/mL，川芎嗪稀釋濃度為0.01～0.05 μg/mL，并制備成混合對照品溶液。

4.根據權利要求1所述含量檢測方法，其特征在于，所述⑶色譜條件中，色譜柱的型號為Agilent Rapid Resolution HD。

5.根據權利要求1所述含量檢測方法，其特征在于，所述⑶色譜條件為：所采用的柱溫45℃，每次進樣預平衡5min，流速為0.5mL/min，進樣量2μL。

6.根據權利要求1所述含量檢測方法，其特征在于，所述⑷質譜條件為：電噴霧離子源，采用多反應監(jiān)測模式，干燥氣溫度350℃，干燥氣流速9 L/min，噴嘴電壓45psi，鞘氣溫度250℃，鞘氣流速11L/min，正、負離子分別掃描模式，進行測定。