[發(fā)明專利]一種T淋巴細胞無血清培養(yǎng)基及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811256739.3
• 申請日: 2018-10-26
• 公開（公告）號: CN109294986A
• 公開（公告）日: 2019-02-01
• 發(fā)明（設計）人: 魏宗科;林科佳;胡銳;張若楠
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市潤科生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 深圳市精英專利事務所 44242
• 代理人: 王文伶

本發(fā)明涉及細胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種T淋巴細胞無血清培養(yǎng)基及其制備方法。本發(fā)明通過以RPMI?1640培養(yǎng)基和IMDM培養(yǎng)基組成基礎(chǔ)培養(yǎng)基，再添加適量的各所述物質(zhì)，形成一種新的可適用于臨床使用的T淋巴細胞無血清培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基使用安全，質(zhì)量穩(wěn)定且成本低廉。采用該培養(yǎng)基擴增培養(yǎng)T淋巴細胞與采用現(xiàn)有技術(shù)常用的GIBCO AIM?V培養(yǎng)基擴增培養(yǎng)T淋巴細胞，兩者的擴增倍數(shù)無明顯差異；另外，CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD56+細胞亞群比較及體外殺傷結(jié)果比較均無明顯差異。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及細胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種T淋巴細胞無血清培養(yǎng)基及其制備方法。

背景技術(shù)

人外周血中含有多種免疫細胞，其中淋巴細胞是人體主要的免疫細胞類型，包括T細胞、B細胞和自然殺傷細胞等。特異性T細胞主要分為兩種，CD4+T細胞和CD8+T細胞。在過繼性免疫細胞治療中，CD4+T細胞除了自身具有殺傷能力外，更可以輔助機體自身的免疫細胞以及共過繼的免疫細胞，具有很強的泛用性，并能與CD8+T細胞相互補充。CD4+T淋巴細胞可以分為三個亞群，初始T淋巴細胞、效應性T淋巴細胞以及記憶性T淋巴細胞。由于T淋巴細胞的重要性及在免疫細胞治療中的推廣應用，有效地培養(yǎng)擴增T淋巴細胞以滿足供給需求尤為重要，而在擴增培養(yǎng)技術(shù)中，培養(yǎng)基對細胞培養(yǎng)的成敗及效率有決定性的影響，因此，開發(fā)一種具有更好的安全、穩(wěn)定、高效、廉價等特性的更適用于臨床使用的T淋巴細胞培養(yǎng)基，是該領(lǐng)域目前研究的重點項目之一。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)存在的以上問題，提供一種使用安全，質(zhì)量穩(wěn)定且成本低廉，適用于臨床使用的T淋巴細胞無血清培養(yǎng)基，以及該種T淋巴細胞無血清培養(yǎng)基的制備方法。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案。

一種T淋巴細胞無血清培養(yǎng)基，包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加物；

所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基由RPMI-1640培養(yǎng)基和IMDM培養(yǎng)基組成；

所述添加物由以下物質(zhì)組成且各物質(zhì)在所述T淋巴細胞無血清培養(yǎng)基中的濃度如下：

胰島素的濃度為3-50mg/L；人血清白蛋的濃度為1-10g/L；人轉(zhuǎn)鐵蛋白的濃度為3-50mg/L；乙醇胺的濃度為3-50μmol/L；GlutaMax-I的濃度為5-20ml/L；硫代甘油的濃度為10-100μmol/L；維生素C的濃度為10-200mg/L；丙酮酸鈉的濃度為50-200mg/L；銅元素的濃度為6.26×10^-7-6.7×10^-5mmol/L；鐵元素的濃度為8.27×10^-5-5.79×10^-2mmol/L；鋅元素的濃度為1.24×10^-4-7.43×10^-2mmol/L；硒元素的濃度為5.78×10^-7-3.47×10^-4mmol/L。

優(yōu)選的，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基由等體積的RPMI-1640培養(yǎng)基和IMDM培養(yǎng)基組成。

優(yōu)選的，所述銅元素以硫酸銅的形式添加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，所述T淋巴細胞無血清培養(yǎng)基中硫酸銅的濃度為0.1-10.7μg/L。

優(yōu)選的，所述鐵元素以硝酸鐵的形式添加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，所述T淋巴細胞無血清培養(yǎng)基中硝酸鐵的濃度為0.02-14mg/L。

優(yōu)選的，所述鋅元素以硫酸鋅的形式添加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，所述T淋巴細胞無血清培養(yǎng)基中硫酸鋅的濃度為0.02-12mg/L。

優(yōu)選的，所述硒元素以亞硒酸鈉的形式添加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，所述T淋巴細胞無血清培養(yǎng)基中亞硒酸鈉的濃度為0.1-60μg/L。

優(yōu)選的，所述胰島素為使用酵母為載體生產(chǎn)出來的重組人胰島素。

優(yōu)選的，所述人轉(zhuǎn)鐵蛋白來源于人血漿。