[發明專利]一種T淋巴細胞無血清培養基及其制備方法

在審

• 申請號: 201811256739.3
• 申請日: 2018-10-26
• 公開（公告）號: CN109294986A
• 公開（公告）日: 2019-02-01
• 發明（設計）人: 魏宗科;林科佳;胡銳;張若楠
• 申請（專利權）人: 深圳市潤科生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 深圳市精英專利事務所 44242
• 代理人: 王文伶

1.一種T淋巴細胞無血清培養基，其特征在于，包括基礎培養基和添加物；

所述基礎培養基由RPMI-1640培養基和IMDM培養基組成；

所述添加物由以下物質組成且各物質在所述T淋巴細胞無血清培養基中的濃度如下：

胰島素的濃度為3-50mg/L；人血清白蛋的濃度為1-10g/L；人轉鐵蛋白的濃度為3-50mg/L；乙醇胺的濃度為3-50μmol/L；GlutaMax-I的濃度為5-20ml/L；硫代甘油的濃度為10-100μmol/L；維生素C的濃度為10-200mg/L；丙酮酸鈉的濃度為50-200mg/L；銅元素的濃度為6.26×10^-7-6.7×10^-5mmol/L；鐵元素的濃度為8.27×10^-5-5.79×10^-2mmol/L；鋅元素的濃度為1.24×10^-4-7.43×10^-2mmol/L；硒元素的濃度為5.78×10^-7-3.47×10^-4mmol/L。

2.根據權利要求1所述的T淋巴細胞無血清培養基，其特征在于，所述基礎培養基由等體積的RPMI-1640培養基和IMDM培養基組成。

3.根據權利要求1所述的T淋巴細胞無血清培養基，其特征在于，所述銅元素以硫酸銅的形式添加到基礎培養基中，所述T淋巴細胞無血清培養基中硫酸銅的濃度為0.1-10.7μg/L。

4.根據權利要求1所述的T淋巴細胞無血清培養基，其特征在于，所述鐵元素以硝酸鐵的形式添加到基礎培養基中，所述T淋巴細胞無血清培養基中硝酸鐵的濃度為0.02-14mg/L。

5.根據權利要求1所述的T淋巴細胞無血清培養基，其特征在于，所述鋅元素以硫酸鋅的形式添加到基礎培養基中，所述T淋巴細胞無血清培養基中硫酸鋅的濃度為0.02-12mg/L。

6.根據權利要求1所述的T淋巴細胞無血清培養基，其特征在于，所述硒元素以亞硒酸鈉的形式添加到基礎培養基中，所述T淋巴細胞無血清培養基中亞硒酸鈉的濃度為0.1-60μg/L。

7.根據權利要求1-6任一項所述的T淋巴細胞無血清培養基，其特征在于，所述胰島素為使用酵母為載體生產出來的重組人胰島素。

8.根據權利要求1-6任一項所述的T淋巴細胞無血清培養基，其特征在于，所述人轉鐵蛋白來源于人血漿。

9.一種如權利要求1-8任一項所述T淋巴細胞無血清培養基的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、將RPMI-1640培養基與IMDM培養基混合均勻，形成基礎培養基；

S2、向基礎培養基中添加胰島素、人血清白蛋白和轉鐵蛋白，并混合均勻；

S3、繼續向基礎培養基中添加乙醇胺，并混合均勻；

S4、繼續向基礎培養基中添加GlutaMax-I，并混合均勻；

S5、繼續向基礎培養基中添加硫代甘油、維生素C和丙酮酸鈉，并混合均勻；

S6、繼續向基礎培養基中添加銅元素、鐵元素、鋅元素和硒元素，并混合均勻；

S7、用0.22μm的濾膜過濾步驟S6形成的混合液體，收集濾液，即為T淋巴細胞無血清培養基。