[發明專利]金蓮花多糖的提取方法及其體外活性的檢測方法

在審

• 申請號: 201811255817.8
• 申請日: 2018-10-17
• 公開（公告）號: CN109142131A
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發明（設計）人: 劉洋;鄭明珠;周鴻立;馬季
• 申請（專利權）人: 吉林化工學院
• 主分類號: G01N5/02
• 分類號: G01N5/02;G01N5/04;G01N21/31
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種金蓮花多糖的提取方法及其體外活性的檢測方法，利用水體醇沉的方法提取多糖，用Sevag法除蛋白質；利用比重法，通過與傳統保濕劑做對比來研究多糖保濕與吸濕性；將L?抗壞血酸與多糖作對比，通過測定樣品對總還原力、DPPH和ABTS自由基的清除率，來研究金蓮花多糖的體外抗氧化性。

技術領域

本發明涉及中草藥檢測領域，具體涉及一種金蓮花多糖的提取方法及其體外活性的檢測方法。

背景技術

金蓮花是毛茛科植物金蓮花的干燥花蕾及花瓣，廣泛分布于西北、西南、東北地區。《本草綱目拾遺》謂其“味苦、性寒、無毒”，可以治療口瘡、喉嚨腫痛、浮熱牙宣、耳疼、目痛，并具“明目、解嵐障”等功效。金蓮花中主要含有多糖、黃酮、生物堿等多種活性成分，具有清熱解毒養肝明目提神健胃的作用，對口腔炎咽炎扁桃體炎急性鼓膜炎等多種炎癥均有明顯療效。

發明內容

本發明的目的在于提供一種金蓮花多糖的提取方法及其體外活性的檢測方法。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：

金蓮花多糖的提取方法，包括如下步驟：

按料液比1∶60的比例向金蓮花花瓣或花莖的粉末中加入適量水，在80℃的條件下水浴加熱3h，每隔30min用玻璃棒攪拌一次，反復浸提三次，抽濾得清液，合并上清液，即得；上述金蓮花多糖的活性通過以下方法檢測：

A、多糖吸濕性檢測：

將金蓮花多糖樣品盛放于鋁盒中并于烘箱50℃烘干至恒重后，放于盛有飽和硫酸銨溶液和飽和碳酸鈉溶液的干燥器中，即置于相對濕度為81％以及43％(RH81％和RH43％)的干燥器中，并將整個干燥器放置于恒溫培養箱中，恒溫25℃，分別于放置4h、8h、12h、20h、44h后用分析天平精確稱取質量，通過下式計算多糖的吸濕率：吸濕率(％)＝(樣品水分的增加量/樣品原質量)×100％；

B、多糖保濕性檢測

在洗凈并干燥的干燥器底部加入干燥的變色硅膠，每份金蓮花多糖樣品加入20ml蒸餾水，并再次精確稱取質量，放置于干燥器內，并將整個干燥器放置于25℃恒溫培養箱中，分別于放置4h、8h、12h、20h、44h后用分析天平精確稱取質量，通過下式計算多糖的保濕率：保濕率(％)＝(樣品水分的減少量/樣品原質量)×100％；

C、多糖的抗氧化檢測

(1)總還原力的測定

取1ml不同質量濃度多糖溶液，加入2.5ml，pH6.6的磷酸緩沖液，之后加入3ml質量分數1％的鐵氰化鉀水溶液，充分混勻后于50℃水浴中保溫10min；取出后迅速冷卻，再加入2.5ml質量分數10％的三氯乙酸水溶液，振蕩搖勻，于3000r/min，離心10min；移取上清液2.5ml于試管中，加2.5ml蒸餾水和0.5ml質量分數0.1％的三氯化鐵水溶液，室溫下避光反應20min，于700nm處測定吸光值；

(2)DPPH清除能力的測定

取1ml不同質量濃度的多糖溶液，加入3ml，0.2mmol/L的DPPH自由基乙醇溶液，混勻后加入4.0ml乙醇溶液，于室溫下避光反應30min后，在517nm下測定吸光度，按以下公式計算樣品對·DPPH的清除率：

式中：A_c為空白樣品的吸光值，A_s為加入不同濃度樣品后的吸光值。

(3)ABTS自由基清除能力的測定