[發明專利]金蓮花多糖的提取方法及其體外活性的檢測方法

在審

• 申請號: 201811255817.8
• 申請日: 2018-10-17
• 公開（公告）號: CN109142131A
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發明（設計）人: 劉洋;鄭明珠;周鴻立;馬季
• 申請（專利權）人: 吉林化工學院
• 主分類號: G01N5/02
• 分類號: G01N5/02;G01N5/04;G01N21/31
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.金蓮花多糖的提取方法，其特征在于：包括如下步驟：

按料液比1∶60的比例向金蓮花花瓣或花莖的粉末中加入適量水，在80℃的條件下水浴加熱3h，每隔30min用玻璃棒攪拌一次，反復浸提三次，抽濾得清液，合并上清液，即得。

2.金蓮花多糖的體外活性檢測方法，其特征在于：

A、多糖吸濕性檢測：

將金蓮花多糖樣品盛放于鋁盒中并于烘箱50℃烘干至恒重后，放于盛有飽和硫酸銨溶液和飽和碳酸鈉溶液的干燥器中，即置于相對濕度為81％以及43％的干燥器中，并將整個干燥器放置于恒溫培養箱中，恒溫25℃，分別于放置4h、8h、12h、20h、44h后用分析天平精確稱取質量，通過下式計算多糖的吸濕率：吸濕率(％)＝(樣品水分的增加量/樣品原質量)×100％；

B、多糖保濕性檢測

在洗凈并干燥的干燥器底部加入干燥的變色硅膠，每份金蓮花多糖樣品加入20ml蒸餾水，并再次精確稱取質量，放置于干燥器內，并將整個干燥器放置于25℃恒溫培養箱中，分別于放置4h、8h、12h、20h、44h后用分析天平精確稱取質量，通過下式計算多糖的保濕率：保濕率(％)＝(樣品水分的減少量/樣品原質量)×100％；

C、多糖的抗氧化檢測

(1)總還原力的測定

取1ml不同質量濃度多糖溶液，加入2.5ml，pH6.6的磷酸緩沖液，之后加入3ml質量分數1％的鐵氰化鉀水溶液，充分混勻后于50℃水浴中保溫10min；取出后迅速冷卻，再加入2.5ml質量分數10％的三氯乙酸水溶液，振蕩搖勻，于3000r/min，離心10min；移取上清液2.5ml于試管中，加2.5ml蒸餾水和0.5ml質量分數0.1％的三氯化鐵水溶液，室溫下避光反應20min，于700nm處測定吸光值；

(2)DPPH清除能力的測定

取1ml不同質量濃度的多糖溶液，加入3ml，0.2mmol/L的DPPH自由基乙醇溶液，混勻后加入4.0ml乙醇溶液，于室溫下避光反應30min后，在517nm下測定吸光度，按以下公式計算樣品對·DPPH的清除率：

式中：A_c為空白樣品的吸光值，A_s為加入不同濃度樣品后的吸光值。

(3)ABTS自由基清除能力的測定

將7mmol/L的ABTS溶液10ml與終濃度為2.45mmol/L的過硫酸鉀溶液10ml混合，于室溫、陰暗條件下放置14-16小時，使用前用0.2mol/L的pH＝7.4的磷酸緩沖液將其稀釋至吸光度為0.72～1.2，即得到ABTS自由基工作液；

取不同質量濃度的多糖溶液各200μL，加入ABTS自由基工作液4ml，反應6min后在波長734nm處測吸光度，按以下公式計算樣品對ABTS自由基的清除率。

式中：A_c為空白樣品的吸光值，A_s為加入不同濃度樣品后的吸光值。