[發(fā)明專利]一種檢測動物血液皮質(zhì)醇的試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811254343.5
• 申請日: 2018-10-26
• 公開（公告）號: CN109444408A
• 公開（公告）日: 2019-03-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高翠華;冉鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 成都普利泰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/552
• 分類號: G01N33/552;G01N33/577
• 代理公司: 成都嘉企源知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 51246
• 代理人: 胡林

本發(fā)明公開了一種檢測動物血液皮質(zhì)醇的試劑盒，其包括皮質(zhì)醇單克隆抗體包被的毛細(xì)管、堿性磷酸酶標(biāo)記的皮質(zhì)醇抗原類似物、催化堿性磷酸酶發(fā)光的化學(xué)發(fā)光底物、ANS鹽釋放劑、皮質(zhì)醇校準(zhǔn)品和清洗液。本發(fā)明在測定犬、貓等動物血液皮質(zhì)醇含量時，具有操作簡單、靈敏度高、特異性強(qiáng)、線性范圍寬、穩(wěn)定性好和試劑用量小的優(yōu)點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于免疫分析技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種檢測動物血液中皮質(zhì)醇的試劑盒。

背景技術(shù)

皮質(zhì)醇（cortisol），亦稱氫化可的松，是從腎上腺皮質(zhì)分泌的對糖類代謝具有最強(qiáng)作用的腎上腺皮質(zhì)激素。皮質(zhì)醇的分泌主要受垂體分泌的促腎上腺皮質(zhì)激素的調(diào)節(jié)，其分泌有明顯的晝夜節(jié)律，上午8時左右分泌達(dá)高峰，以后逐漸下降，午夜零點達(dá)到最低值。皮質(zhì)醇在操縱情緒和健康、免疫細(xì)胞和炎癥、血管和血壓間聯(lián)系，以及維護(hù)締結(jié)組織等方面具有特別重要的功效。

皮質(zhì)醇在血液中以結(jié)合態(tài)和游離態(tài)兩種形式存在。游離狀態(tài)的皮質(zhì)醇僅占10%左右，具有生物活性；結(jié)合態(tài)者主要與糖皮質(zhì)類固醇結(jié)合蛋白（CBG）相結(jié)合，少量與白蛋白結(jié)合，無生物活性。因此要準(zhǔn)確測試血液中皮質(zhì)醇含量，如何釋放出游離態(tài)的皮質(zhì)醇顯得格外重要。

目前市售的測定犬、貓等動物血液皮質(zhì)醇含量均為elisa試劑盒，其方法學(xué)為酶聯(lián)免疫法，使皮質(zhì)醇抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性，使抗原某種酶連接成酶標(biāo)抗原，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，把受檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺來進(jìn)行定性或定量分析。

采用酶聯(lián)免疫法來測定犬、貓等動物血液皮質(zhì)醇含量存在如下不足之處：該方法靈敏度不足，適合定性和半定量測定，且操作步驟繁瑣，諸多試劑需要客戶自行配置，對實驗操作人員的實驗技能要求高，試劑用量大，由于手工操作步驟較多，易出現(xiàn)錯誤。

申請公布號為CN106501535A，公布日為2017年3月15日的中國發(fā)明專利申請公布了一種ANS鹽復(fù)合釋放劑與檢測血液中皮質(zhì)醇的試劑盒，試劑盒包括以下組分：包被皮質(zhì)醇抗體的磁珠、吖啶酯標(biāo)記的皮質(zhì)醇BSA復(fù)合物、ANS鹽復(fù)合釋放劑和皮質(zhì)醇校準(zhǔn)品。該發(fā)明ANS鹽復(fù)合釋放劑將人體血液樣本中結(jié)合形式的皮質(zhì)醇轉(zhuǎn)變?yōu)橛坞x形式的皮質(zhì)醇，并通過吖啶酯化學(xué)發(fā)光檢測游離皮質(zhì)醇的含量。ANS鹽復(fù)合釋放劑可與不同糖皮質(zhì)類固醇蛋白相結(jié)合，能夠?qū)⒀褐薪Y(jié)合態(tài)的皮質(zhì)醇充分釋放出來。吖啶酯化學(xué)發(fā)光為閃光型發(fā)光，發(fā)光用時少，能夠完全捕捉反應(yīng)所產(chǎn)生的光子；吖啶酯為人工合成物質(zhì)，對樣本干擾物質(zhì)的抗干擾性較高，利用吖啶酯標(biāo)記檢測游離皮質(zhì)醇的含量非常靈敏，使血液樣本中總皮質(zhì)醇的含量測定更為準(zhǔn)確。

該申請?zhí)峁┑脑噭┖写嬖谌缦虏蛔阒帲?/p>

1、只能用于人體血液中皮質(zhì)醇含量的測定，而并不適用于動物血液中皮質(zhì)醇含量的測定；

2、用該試劑盒測定血液中皮質(zhì)醇含量時，還是存在操作步驟繁瑣，諸多試劑需要客戶自行配置，對實驗操作人員的實驗技能要求高，試劑用量大，易出現(xiàn)錯誤的問題。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于采用elisa試劑盒來測定犬、貓等動物血液皮質(zhì)醇含量存在的上述缺陷，本發(fā)明提供了一種檢測動物血液皮質(zhì)醇的試劑盒，通過該試劑盒測定犬、貓等動物血液皮質(zhì)醇含量時，具有操作簡單、靈敏度高、特異性強(qiáng)、線性范圍寬、穩(wěn)定性好和試劑用量小的優(yōu)點。

為了達(dá)到上述技術(shù)目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

一種檢測動物血液皮質(zhì)醇的試劑盒，其特征在于：包括皮質(zhì)醇單克隆抗體包被的毛細(xì)管、堿性磷酸酶標(biāo)記的皮質(zhì)醇抗原類似物、催化堿性磷酸酶發(fā)光的化學(xué)發(fā)光底物、ANS鹽釋放劑、皮質(zhì)醇校準(zhǔn)品和清洗液。