[發明專利]一種蟻獅小分子肽及其分離純化方法和應用

有效

• 申請號: 201811252747.0
• 申請日: 2018-10-25
• 公開（公告）號: CN109485711B
• 公開（公告）日: 2021-07-20
• 發明（設計）人: 黃明星;韓雅莉
• 申請（專利權）人: 廣東工業大學
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K1/34;C07K1/18;C07K1/14;C07K1/36;A61K38/17;A61P35/00
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 林麗明

1.一種蟻獅小分子肽，其特征在于，所述蟻獅小分子肽屬類I型熱休克因子結合蛋白，相對分子質量為9.6kDa，等電點為4.0，氨基酸殘基數是84，氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.權利要求1所述蟻獅小分子肽的分離純化方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1.將活蟻獅洗凈后吸干水分放入離心管中，加入5mL 50mM pH＝8的Tris-HCl緩沖液，置于冰上搗碎蟻獅組織，得蟻獅組織勻漿液；

S2.將S1所得蟻獅組織勻漿液轉移至45mL 50mM pH＝8的Tris-HCl緩沖液中，混勻后于4℃放置2～3h；于4℃、10000rpm離心5min，去掉表面油脂層，收集上清液，得蟻獅粗蛋白液；

S3.采用Sephacryl-S200-HR對蟻獅粗蛋白液進行第一級分離，用2倍體積的50mM pH＝8的Tris-HCl緩沖液平衡，流速為1mL/min；將S2所得蟻獅粗蛋白液用3kDa超濾管濃縮后，取1mL濃縮蛋白液作為樣品上樣；上樣后用50mM pH＝8的Tris-HCl緩沖液洗脫，流速為0.5mL/min；洗脫液每3mL收集一個流份，共得到七個峰ALT1～ALT7；利用MTT法跟蹤檢測各流份，其中峰ALT1和峰ALT6為活性成分；

S4.先用10kDa超濾管分離S3所得峰ALT6，收集濾液；再用3kDa超濾管濃縮濾液，得濃縮蛋白液；取0.2mL濃縮蛋白液上柱Hiload16/60-Superdex-30，Hiload16/60-Superdex-30柱用2倍體積的50mM pH＝8的Tris-HCl緩沖液平衡，流速為1mL/min；上樣后用50mM pH＝8的Tris-HCl緩沖液洗脫，流速為0.5mL/min，洗脫液每3mL收集為一份，利用MTT法跟蹤檢測各流份，其中峰ALT1為活性成分；

S5.陰離子交換柱DEAE-Sepharose-FF用5倍體積的50mM pH＝8.0的Tris-HCl緩沖液平衡，流速為5mL/min；

S6.將S4所得活性成分峰ALT1上樣S5平衡后的陰離子交換柱，用5倍體積的50mM pH＝8.0的Tris-HCl緩沖液洗柱至基線，再用NaCl梯度洗脫，洗脫液每3mL接收為一份，利用MTT法跟蹤檢測各流份，其中峰ALT4為活性成分，即得蟻獅小分子肽。

3.權利要求1所述蟻獅小分子肽在制備治療胃癌的藥物中的應用。

4.權利要求1所述蟻獅小分子肽在制備抑制胃癌細胞增殖或生長的制劑中的應用。

5.根據權利要求4所述應用，其特征在于，所述胃癌細胞為MKN28、MGC803、SGC7901、AGS、MKN45、KATOIII、BGC823中的任一種。