[發明專利]核酸檢測試紙、制備方法和檢測方法

有效

• 申請號: 201811252140.2
• 申請日: 2018-10-25
• 公開（公告）號: CN109321633B
• 公開（公告）日: 2020-08-25
• 發明（設計）人: 何曉聰;徐峰;楊媛媛;劉智;屈治國
• 申請（專利權）人: 西安交通大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 覃婧嬋

公開了一種核酸檢測試紙、制備方法和檢測方法，核酸檢測試紙包括支撐墊，結合墊、檢測墊、吸水墊依次布置在所述支撐墊上，結合墊與檢測墊部分重合，吸水墊與檢測墊部分重合，對照區經由對照探針溶液加載在檢測墊上形成，檢測區經由捕獲探針溶液加載在檢測墊上形成，設在檢測墊上的固態可溶鹽柱位于結合墊和檢測區之間，可溶鹽柱經由鹽溶液在檢測墊加熱蒸發以在其孔隙中析出鹽結晶形成。

技術領域

本發明涉及一種生物試紙檢測技術領域，特別是一種核酸檢測試紙、制備方法和檢測方法。

背景技術

核酸檢測是分子生物學領域的研究熱點，已廣泛應用于臨床疾病檢測、食品安全和環境污染等領域。傳統的核酸檢測方法(如PCR)存在操作過程復雜耗時，檢測成本較高，需要專門的設備和專業的技術人員等缺點和局限性。近年來，紙基微流控檢測技術發展迅速，并開始應用于核酸檢測。利用紙基微流控技術進行核酸檢測操作簡單、檢測快速、成本低廉且攜帶方便，受到人們的關注和重視。然而，目前基于核酸的紙基檢測方法仍存在檢測靈敏度不高的問題，難以達到臨床檢測要求，極大程度上限制了這種方法的應用和普及。因此，增強基于核酸的試紙檢測信號，提高其檢測靈敏度，對于促進該檢測方法的實際應用，發揮其潛在應用價值具有十分重要的意義。

為增強側流試紙檢測信號，國內外學者進行了多方面的研究，包括增強顯色顆粒的光學性質、減緩液體流速、轉換顯色信號等方法。例如，將納米金顯色顆粒結合或聚集到一起，形成較大的納米金團聚體，增大試紙檢測線的顯色強度；在單個納米金顆粒表面吸附金或銀金屬顆粒，從而增加單個納米金顆粒的尺寸和光學強度，最終實現檢測信號的提高；在單個納米金顆粒表面修飾酶類，利用酶促反應產生的顏色變化增強檢測信號。但這些方法實驗過程較復雜，穩定性不高，難以應用于臨床實踐。增強側流試紙檢測信號的另一個方法是有效控制檢測過程中液體的流速，已有學者通過改變試紙的幾何形狀、在試紙中增加疏水性障礙或改變試紙的親疏水性等方法延緩液體流速，增加試劑的反應時間，增強試紙的檢測信號。然而，這些方法大多制造過程復雜、批量生產差異大、穩定性不高。另外，研究者利用納米金的光熱效應將光信號轉換成溫度信號、利用上轉換納米顆粒在激發狀態下發出的熒光來增強檢測靈敏度，但這些方法均需要額外的檢測或激發裝置，不利于集成、生產和臨床應用。

在背景技術部分中公開的上述信息僅僅用于增強對本發明背景的理解，因此可能包含不構成在本國中本領域普通技術人員公知的現有技術的信息。

發明內容

為解決上述現有技術的不足之處，本發明提供一種核酸檢測試紙、制備方法和檢測方法，顯著提高其檢測靈敏度，操作簡單，成本低廉，適用性強，達到快速、高效、便捷檢測的目的。

本發明的目的是通過以下技術方案予以實現。

本發明的一個方面，一種核酸檢測試紙包括，

支撐墊，

結合墊、檢測墊、吸水墊依次布置在所述支撐墊上，結合墊與檢測墊部分重合，吸水墊與檢測墊部分重合，

對照區，其經由對照探針溶液加載在檢測墊上形成，

檢測區，其經由捕獲探針溶液加載在檢測墊上形成，

可溶鹽柱，設在檢測墊上的固態可溶鹽柱位于結合墊和檢測區之間，可溶鹽柱經由鹽溶液在檢測墊加熱蒸發以在其孔隙中析出鹽結晶形成。

所述的核酸檢測試紙中，所述結合墊中包含檢測探針-顯色顆粒復合物，所述檢測探針-顯色顆粒復合物經由顯色顆粒膠體溶液與檢測探針溶液混合反應形成。

所述的核酸檢測試紙中，所述檢測探針溶液由檢測探針粉末、醋酸緩沖液、TCEP和超純水組成，對照探針溶液由對照探針粉末、鏈霉親和素溶液、PBS緩沖液和無水乙醇組成，捕獲探針溶液由捕獲探針粉末、鏈霉親和素溶液、PBS緩沖液和無水乙醇組成，所述鹽溶液包括SSC緩沖液、氯化鈉溶液、檸檬酸鈉溶液、醋酸鈉溶液、PBS緩沖液和/或碳酸鹽緩沖液。