[發(fā)明專利]五味消毒飲制劑指紋圖譜的建立方法及其指紋圖譜

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• 申請日: 2018-10-25
• 公開（公告）號: CN109001346A
• 公開（公告）日: 2018-12-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 苗得足;胡清文;焦啟揚(yáng);王嬌;曹桂東;單紀(jì)苗;相恒云;曾麗麗
• 申請（專利權(quán)）人: 瑞陽制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/86
• 代理公司: 青島發(fā)思特專利商標(biāo)代理有限公司 37212
• 代理人: 馬俊榮

1.一種五味消毒飲制劑指紋圖譜的建立方法，其特征在于：具體包括以下步驟：

(1)待測樣品溶液的制備

提供不同批次的五味消毒飲顆粒劑樣品，研細(xì)，分別取一定重量的五味消毒飲顆粒劑樣品置于容器中，向容器中加入體積百分濃度30％的甲醇水溶液并進(jìn)行超聲溶解，再加入體積百分濃度30％的甲醇水溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，微孔濾膜濾過，取濾液即得待測樣品溶液；

(2)參照物溶液的制備

取紫草氰苷、格列風(fēng)內(nèi)酯、新綠原酸、綠原酸、秦皮乙素、隱綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C、木犀草苷和蒙花苷，加甲醇溶解，制成每1ml含各對照品10μg的溶液，作為參照物溶液；

(3)分別精密吸取參照物溶液和供試品溶液各10μl，注入超高效液相色譜儀，記錄60分鐘內(nèi)的指紋圖譜，指紋圖譜測定的色譜條件為：

色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；柱溫：25-35℃；流速：0.8-1.2ml/min；進(jìn)樣量為5-10μl；紫外檢測波長：220-260nm；

(4)將待測樣品的指紋圖譜積分信號導(dǎo)入中國藥典委的“中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)A版”軟件；選擇不同批次五味消毒飲制劑的指紋圖譜中均存在的色譜峰作為共有峰；用平均值計(jì)算法計(jì)算相似度結(jié)果，并生成標(biāo)準(zhǔn)對照指紋圖譜；計(jì)算各共有峰的相對保留時(shí)間以及各共有峰相對保留時(shí)間與參照峰相對保留時(shí)間的比值。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的五味消毒飲制劑指紋圖譜的建立方法，其特征在于：步驟(1)的具體過程為：提供不同批次的五味消毒飲顆粒劑樣品，研細(xì)，分別取3g五味消毒飲顆粒劑樣品置于具塞錐形瓶中，加入體積百分濃度30％的甲醇水溶液25ml，密塞，稱定重量，并進(jìn)行超聲處理，超聲處理后，再加入體積百分濃度30％的甲醇水溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，微孔濾膜濾過，取濾液即得待測樣品溶液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的五味消毒飲制劑指紋圖譜的建立方法，其特征在于：步驟(3)所述的色譜條件中流動相是以下(1)至(4)中的任意一種：

(1)流動相A體積百分濃度0.2％甲酸水溶液–流動相B甲醇水溶液；

(2)流動相A體積百分濃度0.1％磷酸水溶液–流動相B甲醇水溶液；

(3)流動相A體積百分濃度0.2％醋酸水溶液–流動相B甲醇水溶液；

(4)流動相A體積百分濃度0.1％三氟乙酸水溶液–流動相B甲醇水溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的五味消毒飲制劑指紋圖譜的建立方法，其特征在于：步驟(3)所述的色譜條件中洗脫方式采用梯度洗脫，梯度洗脫的流程是以下(1)至(3)中的任意一種：

(1)0～10min，體積百分濃度5-20％流動相B，10～20min，體積百分濃度20％流動相B，20～30min，體積百分濃度20％–35％流動相B，30～40min，體積百分濃度35％–45％流動相B，40～50min，體積百分濃度45-80％流動相B，50～51min，體積百分濃度80-5％流動相B，51～60min，體積百分濃度5％流動相B；

(2)0～3min，體積百分濃度5％流動相B，3～10min，體積百分濃度5-20％流動相B，10～20min，體積百分濃度20％流動相B，20～30min，體積百分濃度20％–35％流動相B，30～40min，體積百分濃度35-45％流動相B，40～50min，體積百分濃度45-90％流動相B，50～51min，體積百分濃度90-5％流動相B，51～60min，體積百分濃度5％流動相B；

(3)0～10min，體積百分濃度10-20％流動相B，10～20min，體積百分濃度20％流動相B，20～40min，體積百分濃度20％-70％流動相B，40～45min，體積百分濃度70％流動相B，45～46min，體積百分濃度70-10％流動相B，46～55min，體積百分濃度10％流動相B。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的五味消毒飲制劑指紋圖譜的建立方法，其特征在于：紫外檢測波長為240nm、254nm或260nm中的一種。