[發明專利]一種蓮芝消炎膠囊HPLC特征圖譜及其構建方法和應用

有效

• 申請號: 201811249095.5
• 申請日: 2018-10-25
• 公開（公告）號: CN109142588B
• 公開（公告）日: 2021-07-09
• 發明（設計）人: 鄒洪平;江志強;鄭如文;辜喜隆;董穗娟;杜海泳
• 申請（專利權）人: 廣州白云山光華制藥股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/86
• 代理公司: 廣州廣典知識產權代理事務所(普通合伙) 44365
• 代理人: 萬志香

1.一種蓮芝消炎膠囊HPLC特征圖譜的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)供試品溶液制備：取蓮芝消炎膠囊研細，向細粉中加入甲醇超聲提取，搖勻，濾過，取續濾液，得到供試品溶液；

(2)對照品溶液制備：取穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯對照品，加入甲醇溶解，得到對照品溶液；

(3)陰性樣品溶液制備：分別取穿心蓮干浸膏、山芝麻干浸膏研細，向細粉中加入甲醇超聲提取，搖勻，濾過，取續濾液，得到穿心蓮陰性樣品溶液和山芝麻陰性樣品溶液；

(4)高效液相色譜檢測，構建蓮芝消炎膠囊HPLC特征圖譜；

所述步驟(4)中色譜條件為：色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠填充色譜柱；流動相：以乙腈為流動相A，以0.01％～0.2％磷酸水溶液為流動相B進行梯度洗脫，所述梯度洗脫條件為：0～5min，流動相中A(3％～7％→18％～22％)，流動相中B(93％～97％→78％～82％)；5～15min，流動相中A(18％～22％→28％～32％)，流動相中B(78％～82％→68％～72％)；15～25min，流動相中A(28％～32％→33％～35％)，流動相中B(68％～72％→65％～67％)；25～30min，流動相中A(33％～35％→36％～38％)，流動相中B(65％～67％→62％～64％)；30～45min，流動相中A(36％～38％→38％～40％)，流動相中B(62％～64％→60％～62％)；柱溫：25～35℃；流速：0.8～1.2ml/min；檢測波長：225nm；理論板數：按穿心蓮內酯峰計算不低于5000；分別精密吸取對照品溶液、陰性樣品溶液和供試品溶液各10～50μl，注入高效液相色譜儀，測定；

所述步驟(1)中蓮芝消炎膠囊細粉與甲醇的質量體積比為(0.1～2.0)g：(10～50)ml；

所述步驟(2)獲得的對照品溶液中，穿心蓮內酯濃度為0.1mg/ml～4.0mg/ml，脫水穿心蓮內酯濃度為0.1mg/ml～4.0mg/ml；

所述步驟(3)中穿心蓮干浸膏細粉與甲醇的質量體積比為(0.04～1.0)g：(10～20)ml；所述山芝麻干浸膏細粉與甲醇的質量體積比為(0.04～1.0)g：(10～20)ml。

2.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述步驟(4)中構建蓮芝消炎膠囊HPLC特征圖譜的方法為：(1)通過對照品溶液、陰性樣品溶液和供試品溶液色譜圖中的色譜峰出峰時間和色譜峰是否存在進行比較，對供試品溶液圖譜中的共有特征峰進行指認，得到11個共有特征峰；(2)對10批蓮芝消炎膠囊樣品進行HPLC檢測，采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價軟件生成由11個共有特征峰構成的蓮芝消炎膠囊HPLC特征圖譜。

3.根據權利要求2所述的構建方法，其特征在于，所述蓮芝消炎膠囊HPLC特征圖譜包括11個共有特征峰，其中，1～6號峰為未知成分峰，屬于山芝麻；7～11號峰屬于穿心蓮，其中，7號峰為穿心蓮內酯峰，11號峰為脫水穿心蓮內酯峰，其他為未知成分峰；以穿心蓮內酯參照峰7號峰為參照峰，各特征峰的相對保留時間為：1號峰：0.33±0.033；2號峰：0.40±0.040；3號峰：0.50±0.050；4號峰：0.70±0.070；5號峰：0.71±0.071；6號峰：0.80±0.080；7號峰：1.00±0.10；8號峰：1.07±0.107；9號峰：1.49±0.149；10號峰：1.76±0.176；11號峰：1.82±0.182。

4.根據權利要求1～3任一項所述的構建方法構建的蓮芝消炎膠囊HPLC特征圖譜在蓮芝消炎膠囊檢測中的應用。

5.一種蓮芝消炎膠囊檢測方法，其特征在于，利用高效液相色譜法檢測得到待測蓮芝消炎膠囊HPLC圖譜，采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價軟件與蓮芝消炎膠囊HPLC特征圖譜進行分析，相似度大于0.90為合格產品；包括以下步驟：1)取待測蓮芝消炎膠囊樣品，研細，向細粉中加入甲醇超聲提取，搖勻，濾過，取續濾液，得到供試品溶液；利用高效液相色譜法檢測得到待測蓮芝消炎膠囊HPLC圖譜，所述色譜條件為：色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠填充色譜柱；流動相：以乙腈為流動相A，以0.01％～0.2％磷酸水溶液為流動相B進行梯度洗脫，所述梯度洗脫條件為：0～5min，流動相中A(3％～7％→18％～22％)，流動相中B(93％～97％→78％～82％)；5～15min，流動相中A(18％～22％→28％～32％)，流動相中B(78％～82％→68％～72％)；15～25min，流動相中A(28％～32％→33％～35％)，流動相中B(68％～72％→65％～67％)；25～30min，流動相中A(33％～35％→36％～38％)，流動相中B(65％～67％→62％～64％)；30～45min，流動相中A(36％～38％→38％～40％)，流動相中B(62％～64％→60％～62％)；柱溫：25～35℃；流速：0.8～1.2ml/min；檢測波長：225nm；理論板數：按穿心蓮內酯峰計算不低于5000；精密吸取待測蓮芝消炎膠囊樣品制備得到的供試品溶液10～50μl，注入高效液相色譜儀，測定；2)將步驟1)獲得的待測蓮芝消炎膠囊HPLC圖譜，采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價軟件與蓮芝消炎膠囊HPLC特征圖譜進行分析，相似度大于0.90為合格產品；所述蓮芝消炎膠囊HPLC特征圖譜包括11個共有特征峰，其中，1～6號峰為未知成分峰，屬于山芝麻；7～11號峰屬于穿心蓮，其中，7號峰為穿心蓮內酯峰，11號峰為脫水穿心蓮內酯峰，其他為未知成分峰；以穿心蓮內酯參照峰7號峰為參照峰，各特征峰的相對保留時間為：1號峰：0.33±0.033；2號峰：0.40±0.040；3號峰：0.50±0.050；4號峰：0.70±0.070；5號峰：0.71±0.071；6號峰：0.80±0.080；7號峰：1.00±0.10；8號峰：1.07±0.107；9號峰：1.49±0.149；10號峰：1.76±0.176；11號峰：1.82±0.182；3)根據步驟2)的比對結果判定待測蓮芝消炎膠囊樣品的質量和/或真偽。