[發明專利]用于準確測定人全血中四種免疫抑制劑類藥物濃度的試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 201811248811.8
• 申請日: 2018-10-25
• 公開（公告）號: CN109406650A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 鄒繼華;沈敏;楊曉東;潘清清;王琳;李全樂;鄒炳德
• 申請（專利權）人: 美康生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 寧波市鄞州甬致專利代理事務所(普通合伙) 33228
• 代理人: 周民樂

本發明提供一種用于準確測定人全血中四種免疫抑制劑類藥物濃度的試劑盒，包括他克莫司、西羅莫司、依維莫司和環孢霉素A的校準品，他克莫司?¹³Cd₂、西羅莫司?d₃、依維莫司?d₄和環孢霉素A?d₄的內標，他克莫司、西羅莫司、依維莫司和環孢霉素A的質控品，樣本處理液，提取液，流動相，復溶液。采用本發明試劑盒來處理全血樣本，通過簡單的蛋白沉淀?液液萃取前處理方法，無需進行復雜的凈化提純步驟就可以獲得干凈的處理液，而且所需樣本量小，可與液相色譜儀串聯質譜儀配套使用；同時，該試劑盒能同時檢測四種不同的免疫抑制劑類藥物，即可單樣本多指標同步檢測，且檢測特異性好，靈敏度高，整個檢測流程時間短、通量高，成本低廉。

技術領域

本發明涉及醫學檢驗技術領域，具體涉及測定人全血中免疫抑制劑類藥物濃度的質譜試劑盒及液相色譜串聯質譜檢測方法。

背景技術

免疫抑制劑在臨床上主要應用于抗移植排斥，治療自身免疫性疾病和變態反應性疾病等。這類藥物治療窗窄、藥動學個體差異較大，需進行治療藥物監測(therapeuticdrug monitoring，TDM)。近年來，世界衛生組織(WHO)及我國衛生部藥物不良反應監測中心的統計資料均顯示，因用藥不當而致死者遠遠高于同期死于各種傳染病的人數。而用藥不當死亡者中，大多是劑量不當所致。可以說隨著醫療技術整體水平的提高，在TDM的指導下制定和調整個體化的合理用藥方案，是藥物治療學發展的必然趨勢。

免疫抑制劑可抑制或減少免疫系統的活性，從而預防器官或者組織排異。由于新的免疫抑制劑不斷加入移植藥物治療序列中，免疫抑制療法無論在規模或者更新速度上均發生了變化。環孢素A(CsA)、他克莫司(TAC)、西羅莫司(SIR)和依維莫司(EVR)是實體器官移植最常用的免疫抑制劑。CsA為親脂性環多肽，具有強大的免疫抑制活性。CsA和TAC通過抑制T淋巴細胞的增值起作用。其直接效應是通過抑制鈣調磷酸酶，然后減少白介素-2基因在T細胞受體轉錄來實現。SIR是從吸水鏈霉菌分離出來的大環內酯。EVR為SIR40-O-(2-羥乙基)衍生物。SIR和EVR與哺乳動物的雷帕霉素(mTOR)復合物靶點結合，抑制T細胞激活的通路。由于治療窗窄、個體內及個體間差異大，上述這些免疫抑制劑都是強制要求TDM的。因此，如能對CsA、TAC、SIR、MPA、PREDL等多種藥物同時進行監測，可以獲得更為完整的治療用藥信息，便于調整個體給藥方案。

CsA、TAC、SIR、EVR與紅細胞廣泛結合，藥物在紅細胞和血漿之間的分配比率超過30:1。因此EDTA抗凝的全血是最常用的樣本基質。全血中免疫抑制劑常用免疫法、HPLC-UV法和LC-MS/MS法進行定量。與LC-MS/MS法相比，免疫法通常高估EVR和SIR的濃度。因為SIR和EVR之間的結構類似，采用免疫法彼此互相干擾。另據報道，免疫法高估TAC濃度27.8％和環孢素30.3％。HPLC-UV法受冗長的運行時間和干擾影響。HPLC-MS/MS提供更高的特異性。由于HPLC-MS/MS的高特異性，目標化合物和可能的干擾物不必達到基線分離，這就可以顯著降低分析運行時間及簡化大量的樣品純化過程。然而，質譜臨床檢驗方法均為實驗室自行建立的方法((laboratory developed tests,LDT)，采用的試劑多為非試劑盒產品，檢測方法難以溯源到參考物質或參考方法，并且檢測結果的準確度、重復性、時間可比性有待臨床進一步驗證。因此，迫切需要商品化的質譜檢測試劑盒。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明提供一種用于準確測定人全血中四種免疫抑制劑類藥物濃度的質譜試劑盒，采用本發明試劑盒來處理全血樣本，無需進行復雜的凈化提純步驟，而且所需樣本量小，可與液相色譜儀串聯質譜儀配套使用，應用于臨床樣本的檢驗；同時，該產品能同時檢測他克莫司、西羅莫司、依維莫司和環孢霉素A這四種免疫抑制劑類藥物，達到單樣本多指標同步檢測功能，具有準確率高、檢測時間短、試劑耗用量少、操作方便等特點。