[發(fā)明專利]永生化的犬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)方法及其用途

在審

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• 申請日: 2018-10-25
• 公開（公告）號: CN109321521A
• 公開（公告）日: 2019-02-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 華進(jìn)聯(lián);方佳;滕鑫;溫新宇;晏原
• 申請（專利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學(xué)
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;A61L27/38;A61L27/60
• 代理公司: 西安新思維專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 61114
• 代理人: 韓翎

本發(fā)明為一種永生化的犬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)方法及其用途，其利用已經(jīng)建立的永生化犬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞系，對犬皮膚缺損進(jìn)行治療，比較了細(xì)胞移植與非移植對創(chuàng)口愈合速度及疤痕平整度的影響，為永生化犬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞系治療犬皮膚缺損的臨床應(yīng)用提供參考。本發(fā)明的技術(shù)方案是：永生化的犬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在治療犬皮膚缺損中的應(yīng)用及永生化的犬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)方法，體外培養(yǎng)包括以下步驟：1）永生化的犬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的復(fù)蘇；2）永生化的犬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的傳代。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及動物干細(xì)胞的體外增殖、移植，具體涉及一種永生化的犬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)培養(yǎng)方法及其用途。

背景技術(shù)

皮膚損傷、皮膚損傷后的疤痕修復(fù)是整形外科關(guān)注的熱點(diǎn)領(lǐng)域。在寵物臨床中，犬類由于其好斗、愛撕咬的天性更易發(fā)生皮膚缺損等皮膚損傷。大面積的全層皮膚缺損難于恢復(fù)，愈合時間長，甚至危及生命。雖然近年來人工皮膚的研究進(jìn)展迅速，但仍無法構(gòu)建具有皮膚各部件如毛囊、汗腺、皮脂腺等的皮膚替代物。然而含有干細(xì)胞的組織工程皮膚及含有干細(xì)胞代謝產(chǎn)物的培養(yǎng)液等在皮膚修復(fù)中表現(xiàn)出理想的修復(fù)效果。目前，間充質(zhì)干細(xì)胞移植用于嚴(yán)重的皮膚缺損治療已是除自體皮膚移植和人工皮膚之外極具應(yīng)用前景的治療方法之一。

脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells，ADSCs）是分離自脂肪組織的成體干細(xì)胞。它具有向成骨、軟骨、脂肪、神經(jīng)、肌肉、真皮等多個方向分化的能力（Naderi N 等，The regenerative role of adipose-derived stem cells (ADSC)in plastic and reconstructive surgery. Int Wound J，2017，14：112-124）。ADSCs的移植在多種創(chuàng)傷性疾病，免疫性疾病，退行性疾病的治療中都表現(xiàn)出極佳的療效（WankhadeUD 等，Advances in adipose-derived stem cells isolation, characterization, andapplication in regenerative tissue engineering. Stem Cells Int，2016，2016:3206807）。在寵物臨床中，ADSCs移植能幫助動物擺脫疾病，提高生活質(zhì)量，因此，逐漸成為一種新興的治療手段。

近年來，有大量研究對間充質(zhì)干細(xì)胞對皮膚創(chuàng)傷的修復(fù)進(jìn)行了嘗試。人臍帶血來源的MSCs在體外可以分化為角質(zhì)形成細(xì)胞（Jackson WM 等，Concise review: clinicaltranslation of wound healing therapies based on mesenchymal stem cells. StemCells Transl Med，2012，1：44-50）。證明了間充質(zhì)干細(xì)胞作為皮膚組織工程種子細(xì)胞的巨大潛力。含有骨髓來源MSCs的組織工程皮膚可以促進(jìn)創(chuàng)口愈合（Wu X，F(xiàn)ibrin glue as thecell-delivery vehicle for mesenchymal stromal cells in regenerative medicine.Cytotherapy，2012，14：555-62）。ADSCs移植可以向血管內(nèi)皮細(xì)胞、真皮成纖維細(xì)胞和表皮細(xì)胞分化，促進(jìn)人創(chuàng)口真皮的形成和創(chuàng)面的上皮化（Spiekman M 等，The power of fatand its adipose-derived stromal cells: emerging concepts for fibrotic scartreatment. J Tissue Eng Regen Med，2017，11：3220-3235）。進(jìn)一步證明了間充質(zhì)干細(xì)胞移植在皮膚損傷修復(fù)中的巨大作用。