[發明專利]用于小麥赤霉病抗性檢測的KASP引物組及其應用

有效

• 申請號: 201811247764.5
• 申請日: 2018-10-25
• 公開（公告）號: CN109182586B
• 公開（公告）日: 2020-07-10
• 發明（設計）人: 姜朋;馬鴻翔;張旭;吳磊;何漪
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務所 32237
• 代理人: 楊文晰

1.用于小麥赤霉病抗性檢測的KASP引物組，其特征在于，該引物組由核苷酸序列如SEQID NO.1所示的前引物AlleleFAM、核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的前引物AlleleHEX、核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的后引物Common組成。

2.如權利要求1所述用于小麥赤霉病抗性檢測的KASP引物組在小麥赤霉病抗性檢測中的應用，其特征在于，具體步驟如下：

利用所述KASP引物組配制PCR檢測體系并進行PCR擴增，然后利用多功能酶標儀檢測PCR擴增產物并進行基因分型，含有等位基因G的小麥樣品赤霉病抗性顯著高于含有等位基因T的小麥樣品。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述PCR檢測體系包括：30 ng· μL^-1 的DNA 2.5μL 、 KASP Mix 2.5μL 、0.07μL KASP Assay Mix;

其中，每100μL 的KASP Assay Mix配制方法如下：100μM 的AlleleFAM 12μL、100μM 的AlleleHEX 12μL 、100μM 的Common 30μL、ddH₂O補足至100μL；

所述PCR擴增是指：94℃熱激活15 min; 94℃變性20 s, 61~55℃退火和延伸60 s, 10個循環且每循環降低0.6℃; 94℃變性20s, 55℃退火和延伸60 s, 26個循環。

4.一種用于小麥赤霉病抗性檢測的試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括：30 ng· μL^-1 的DNA 2.5μL 、 KASP Mix 2.5μL 、0.07μL KASP Assay Mix;

其中，每100μL 的KASP Assay Mix配制方法如下：100μM核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的AlleleFAM 12μL、100μM核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的AlleleHEX 12μL 、100μM核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的Common 30μL、ddH₂O補足至100μL。