[發明專利]一種巴西曲霉用于卷煙防霉劑抑菌效果指示菌的用途及方法在審
| 申請號： | 201811245974.0 | 申請日： | 2018-10-24 |
| 公開（公告）號： | CN109295157A | 公開（公告）日： | 2019-02-01 |
| 發明（設計）人： | 雷聲;楊乾栩;師艷萍;蔣舉興;劉秀明;段焰青;張玲;張曉鳴;夏書芹;陳文怡 | 申請（專利權）人： | 云南中煙工業有限責任公司 |
| 主分類號： | C12Q1/04 | 分類號： | C12Q1/04;C12R1/66 |
| 代理公司： | 北京市領專知識產權代理有限公司 11590 | 代理人： | 陳有業;任文娟 |
| 地址： | 650231 云*** | 國省代碼： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 防霉劑 曲霉 指示菌 抑菌 卷煙 制備 牛津杯 抑菌圈 十字交叉法 安全隱患 標準菌株 記錄數據 培養周期 曲霉孢子 敏感度 實驗組 稀釋液 活化 無菌 懸液 測量 篩選 | ||
1.一種巴西曲霉作為卷煙防霉劑抑菌效果指示菌的用途，其特征在于，所述巴西曲霉指示菌ATCC標準菌株編號為16404。
2.一種巴西曲霉作為卷煙防霉劑抑菌效果指示菌的方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)將商購巴西曲霉于指定條件下活化；
(2)將活化后的巴西曲霉劃線接種于斜面培養基試管中，在靜態恒溫恒濕培養箱中培養，以2天為一個培養周期；
(3)用步驟(2)培養得到的斜面菌落制備巴西曲霉孢子懸液；
(4)利用步驟(3)制得的巴西曲霉孢子懸液制備含1ml巴西曲霉孢子懸液和9ml培養基的含菌平板，搖晃均勻并冷卻；
(5)在含菌平板中均勻放入3個無菌牛津杯；
(6)將防霉劑通過0.45μm針式濾膜過濾，逐級稀釋，得到一定濃度的防霉劑稀釋液；
(7)將步驟(6)得到的防霉劑稀釋液加到步驟(5)的牛津杯中，每個牛津杯加200μl，以等量同濃度防霉劑稀釋液溶劑做為陽性對照組；
(8)將步驟(7)的實驗組和陽性對照組放入恒溫恒濕培養箱中培養，以1天為一個培養周期；
(9)以十字交叉法測量抑菌圈直徑，記錄數據；
(10)評價方法：抑菌圈平均直徑小于8mm為不敏感(-)，8-10mm為低度敏感(+)，10-15mm為中度敏感(++)，15mm以上為高度敏感(+++)。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(2)或(4)所述的培養基配方包括如下成分：馬鈴薯粉6.0g/L；葡萄糖20.0g/L；氯霉素0.1g/L；瓊脂20.0g/L。
4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(2)或(8)所述的培養參數為28℃、85％RH。
5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述巴西曲霉孢子懸液制備方法為：用85mg/ml無菌生理鹽水沖刷含菌落的斜面培養基表面，漩渦震蕩30s得到孢子懸液；經4層無菌紗布過濾兩次后，通過血球計數板計數，稀釋到1×105CFU/ml即得到所述巴西曲霉孢子懸液。
6.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述牛津杯規格為8*6*10mm。
7.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(6)所述的防霉劑為肉桂醛、丁香酚或檸檬醛的一種或幾種。
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