[發明專利]一種三七不定根的誘導方法

在審

• 申請號: 201811234688.4
• 申請日: 2018-10-23
• 公開（公告）號: CN109329056A
• 公開（公告）日: 2019-02-15
• 發明（設計）人: 張宗申;劉志琨;鐘滿;趙悅
• 申請（專利權）人: 大連工業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 大連格智知識產權代理有限公司 21238
• 代理人: 劉琦

本發明公開了一種三七不定根的培養系統和誘導方法，主要包括：S1、組合培養基的配制，將蘸有植物激素的圓形濾紙片與MS瓊脂培養基分層交替鋪設；S2、植物激素分層吸附于不同位置，起到緩釋和依次發揮作用的精準作用；S3、三七愈傷組織的誘導，取無菌外植體置于愈傷組織誘導濾紙片上，經過暗培養，獲得三七愈傷組織；S4、三七不定根的誘導，愈傷組織吸收底層不定根誘導植物激素，不定根開始生長。本發明還保護一種培養基配制方法和操作工藝，為所述組合培養基和不定根誘導技術。本發明可以實現三七不定根的誘導率高，愈傷組織無需進行轉接，生長周期短，收獲方便，無需進行培養基分離，滿足市場需求，具有重大的推廣價值。

技術領域

本發明涉及一種藥用植物不定根誘導方法，特別涉及一種三七不定根誘導方法，屬藥用植物器官培養技術。

背景技術

三七(Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen)又稱作田七，屬于五加科人參屬植物，明代藥學家李時珍曾將其稱為“金不換”。三七的生長條件較為苛刻，對溫度、緯度、濕度等條件有較高的要求，其適應能力較低，因此限制了三七的生長區域，使其在我國只分布于云南文山州及廣西靖西等地。

醫學研究發現三七含有皂苷、黃酮、多糖等多種有效成份。經臨床實踐證明，三七在免疫調節、抗衰老方面具有良好的保健功能，在治療血液系統、心血管系統疾病等方面具有明顯的療效。

近些年來在中藥產業迅速發展的大環境下，由于對三七的深入研究，使三七產品不斷被開發，三七藥材和總皂苷的需求量也不斷增長，組織培養再生三七不定根與種子繁殖方式相比具有周期短、不受四季氣候限制、無重金屬、農藥等有害物質污染的優點，因此受到人們的廣泛關注，被認為是一種有希望緩解土地資源短缺和中藥材質量標準不一的重要途徑。

發明內容

本發明的目的在于提供一種三七不定根的誘導方法。與傳統種植方式相比，本發明重復性好、誘導率高、生長迅速、有效成分含量高、收獲方便。

一種三七不定根的誘導方法，包括以下步驟:

S1、組合培養基的配制：

S11、濾紙片剪裁：取定性濾紙將其裁剪成與無菌組培瓶底部大小一致的圓形紙片，將其放入潔凈的培養皿中牛皮紙密封，121℃、0.1MPa高溫滅菌25min；

S12、MS培養基的配制：準確稱取MS固體粉末溶于水，添加蔗糖和瓊脂，調節pH＝5.8～6.0，121℃、0.1MPa高溫滅菌25min后防止凝固，配制成蔗糖的濃度為30～50g/L，瓊脂含量為8g/L的MS固瓊脂養基，保溫備用；

S13、上層愈傷組織誘導濾紙的制備：取0.5～1.0mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)于超凈工作臺中采用孔徑為0.22μm的濾膜進行過濾除菌，將4片步驟S11所得滅菌后的濾紙片疊放在一起，在2,4-D中浸泡20s，得上層愈傷組織誘導濾紙層；

S14、中層不定根誘導濾紙層的制備：取植物激素于超凈工作臺中分別采用孔徑為0.22μm的濾膜進行過濾除菌后混勻，得混合植物激素1，所述混合植物激素1中含有1.0～2.0mg/L吲哚丁酸(IBA)、1.0～2.0mg/L 2,4-D、0.5～1.0mg/L 6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)和0.2～0.5mg/L萘乙酸(NAA)；將4片步驟S11所得滅菌后的濾紙片疊放在一起，置于所述混合植物激素1中浸泡20s，得中層不定根誘導濾紙層；

S15、底層不定根誘導濾紙層的制備：取植物激素于超凈工作臺中采用孔徑為0.22μm的濾膜進行過濾除菌后混勻，得混合植物激素2，所述混合植物激素2中含有2.5～5.0mg/L IBA、0.2～1.0mg/L NAA、0.2～0.6mg/L 6～BA、0.5～1.0mg/L激動素(KT)和50μmol/L茉莉酸甲酯；將4片步驟S11所得滅菌后的濾紙片疊放在一起，在混合植物激素2中浸泡20s，得底層不定根誘導濾紙層；