[發明專利]檢測蓮草直胸跳甲JHE基因轉錄水平的引物及方法

有效

• 申請號: 201811232458.4
• 申請日: 2018-10-22
• 公開（公告）號: CN109161602B
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發明（設計）人: 鄭麗禎;傅建煒;何肖云;李建宇;史夢竹;林凌鴻;王秋月
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

本發明提供了檢測蓮草直胸跳甲JHE基因轉錄水平的引物及方法，引物序列如SEQ ID NO.1?2所示，本發明建立了蓮草直胸跳甲雌雄蟲取食不同CO₂濃度培育的空心蓮子草后JHE基因表達量檢測的熒光定量PCR法，并進行了轉錄組的測序，對JHE基因熒光定量的表達量趨勢與轉錄組的表達量趨勢做了比較，為研究蓮草直胸跳甲受到環境脅迫時產生的防御機制及JHE基因轉錄水平奠定了基礎。

技術領域

本發明涉及檢測蓮草直胸跳甲JHE基因轉錄水平的引物及方法，屬于生物技術領域。

背景技術

蓮草直胸跳甲屬鞘翅目，葉甲科，是空心蓮子草的主要生防天敵之一。GeorgeVogt于1962年首次發現了蓮草直胸跳甲對空心蓮子草有很好的控制作用。其后，蓮草直胸跳甲在美國、澳大利亞等地被廣泛應用于空心蓮子草的控制，并取得了較好的防治效果。我國于1986年從美國引進蓮草直胸跳甲，并應用于空心蓮子草的生物防治，在四川、浙江、福建、廣西等地取得一定的成功。

保幼激素酯酶(juvenile hormone esterase，JHE)，是大多數昆蟲中最主要的一種降解保幼激素(Ju-venile hormone，JH)的特異性酯酶，對控制昆蟲體內JH滴度起著重要的作用。在昆蟲變態發育過程中，JHE適時出現，對幼蟲正常發育成蛹非常重要，血淋巴中JHE活性很高時，能使JH滴度下降。在發育和生殖時JHE的降解作用有一定的時間特異性。JHE酶活力、含量以及分布因昆蟲的種類、組織器官和發育時期不同而有差異。

昆蟲變態的決定是在缺乏的條件下，由蛻皮激素作用，使合成幼蟲型表皮向合成蛹型表皮轉變等，促使幼蟲變態化蛹，因此，JHE 對昆蟲變態正常進行具有非常重要的作用，Abdel等研究表明 ，當終齡期出現 JHE的活性受到阻礙時，殘存在血液及組織內的JH不能完全分解，導致幼蟲化蛹的失敗，使幼蟲不能及時蛹化而形成巨大的幼蟲。JHE是由脂肪體細胞和上皮細胞產生，它能夠識別血淋巴中保幼激素-血淋巴保幼激素結合蛋白(juvenile hormone-hemolymph juvenile hormone binding protein，JH-hJHBP)復合體，將JH從復合體中分離出來溶到血淋巴中，再由JHE清除JH。JHE 對 JH 的分解具有特異性，不僅能分解游離狀態的JH，而且對JH-hJHBP結合狀態的 JH 也能特異地分解。Touhara 等研究表明，因為 JHE能識別JH-hJHBP復合體，因而能分解與hJHBP 成結合狀態的JH，達到從血液及組織中迅速清除 JH作用。

關于蓮草直胸跳甲JHE基因的表達等研究國內外未見報道，因此采用實時熒光定量PCR研究不同CO₂濃度處理下蓮草直胸跳甲JHE基因的轉錄水平，結果表明，隨著CO₂濃度的升高，雌雄蟲JHE基因的表達量均升高，這與轉錄組表達量上調的變化趨勢一致，說明CO₂濃度升高可以影響JHE基因的表達調控。昆蟲保幼激素是一種昆蟲生長調節劑 ，能通過干擾昆蟲的正常發育而使其死亡 ，具有生物活性高，選擇性明顯，對人 、畜安全及對天敵、益蟲無害，不污染環境等優點。脊椎動物和無脊椎動物的胚后發育和繁殖都是在內分泌的調控之下進行 ，對蓮草直胸跳甲保幼激素酯酶的研究，旨在尋找高效、快捷、綠色的昆蟲防治新方向。

發明內容

本發明的目的是提供檢測蓮草直胸跳甲JHE基因轉錄水平的引物及方法，為全面了解蓮草直胸跳甲JHE基因的轉錄水平而設計的不同處理CO₂濃度。

為實現上述目的，本發明所采用的技術方案如下：

將取食不同CO₂濃度培育的空心蓮子草的蓮草直胸跳甲雌雄蟲各采9只到Eppendorf管中，分為3個生物學重復，共12組樣品。

設計一對檢測蓮草直胸跳甲JHE基因轉錄水平的引物，包括符合熒光定量PCR反應特點的上下游引物：

JHE-F：5`-GCCTATGGTAACTGGTCACAA-3`