[發(fā)明專利]通用型嵌合抗原受體T細(xì)胞制備技術(shù)

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811230858.1
• 申請(qǐng)日: 2018-10-22
• 公開（公告）號(hào): CN109694854A
• 公開（公告）日: 2019-04-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊春暉;劉麗萍;曹衛(wèi);蔡松柏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 亙喜生物科技（上海）有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/10
• 分類號(hào): C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 上海一平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 肖艷;徐迅

本發(fā)明涉及一種通用型嵌合抗原受體T細(xì)胞及其制備方法和應(yīng)用。具體地，本發(fā)明提供了一種CAR?T細(xì)胞，表達(dá)嵌合抗原受體CAR，并且所述細(xì)胞HLA?I與TCR的結(jié)合是被抑制的，所述細(xì)胞中的TCR基因表達(dá)是被沉默的。本發(fā)明的通用型CAR?T細(xì)胞可以用于異體腫瘤治療，且異體輸注時(shí)不會(huì)引起GVHD及HVG反應(yīng)，提高了異體CAR?T細(xì)胞在受體體內(nèi)的存活及抗腫瘤效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫細(xì)胞治療領(lǐng)域，更具體地涉及一種通用型嵌合抗原受體T細(xì)胞及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

細(xì)胞免疫治療是一種新興的、具有顯著療效的腫瘤治療模式，是一種自身免疫抗癌的新型治療方法。它是運(yùn)用生物技術(shù)和生物制劑對(duì)從病人體內(nèi)采集的免疫細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)和擴(kuò)增后回輸?shù)讲∪梭w內(nèi)的方法，來激發(fā)、增強(qiáng)機(jī)體自身免疫功能，從而達(dá)到治療腫瘤的目的。

嵌合免疫抗原受體(Chimeric antigen receptors，CARs)由胞外抗原識(shí)別區(qū)域，通常是scFv(single-chain variable fragment)，跨膜區(qū)以及胞內(nèi)共刺激信號(hào)區(qū)域組成。CARs的胞外段可識(shí)別一個(gè)特異的抗原，隨后通過胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)導(dǎo)該信號(hào)，引起T細(xì)胞的活化增殖、細(xì)胞溶解毒性和分泌細(xì)胞因子，進(jìn)而清除靶細(xì)胞。

CAR-T細(xì)胞在血液系統(tǒng)惡性腫瘤的治療中顯示出前所未有的療效，如對(duì)晚期復(fù)發(fā)難治性急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)治療的完全緩解(CR)可達(dá)到90％，對(duì)慢性淋巴細(xì)白血病(CLL)和部分B細(xì)胞淋巴瘤的CR達(dá)到50％以上。此外，CAR-T細(xì)胞在治療實(shí)體瘤方面也表現(xiàn)出很大的潛力。

在傳統(tǒng)的CART細(xì)胞治療中，首先分離病人自體T細(xì)胞(或者異源供體)，激活并進(jìn)行基因改造產(chǎn)生CAR-T細(xì)胞，隨后注入同一病人體內(nèi)。這種方式患移植物抗宿主病概率極低，抗原被T細(xì)胞以非MHC限制方式識(shí)別。但這種治療方式嚴(yán)重受制于患者的個(gè)體狀況，分離改造細(xì)胞所造成的時(shí)間和金錢成本也非常高。因此，本領(lǐng)域仍然需要進(jìn)一步的研究，開發(fā)一種可以大規(guī)模制備，質(zhì)量均一穩(wěn)定，隨時(shí)可調(diào)用給任何患者的通用型CAR-T細(xì)胞。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種通用型嵌合抗原受體T細(xì)胞及其制備方法和應(yīng)用。

在本發(fā)明的第一方面，提供了一種通用型嵌合抗原受體T細(xì)胞(CAR-T細(xì)胞)，所述CAR-T細(xì)胞具有以下特征：

(a)所述CAR-T細(xì)胞表達(dá)嵌合抗原受體CAR，所述CAR靶向腫瘤細(xì)胞的標(biāo)志物；和

(b)所述CAR-T細(xì)胞HLA-I與TCR(T cell receptor)的結(jié)合是被抑制的。

在另一優(yōu)選例中，所述CAR-T細(xì)胞表達(dá)外源性HLA-E SCT(HLA-E單鏈三聚體)。

在另一優(yōu)選例中，所述的HLA-E SCT包括自身抗原肽，β2M和HLA-E重鏈。

在另一優(yōu)選例中，所述的HLA-E SCT的結(jié)構(gòu)如下式III所示：

L3-S-B-E (III)

式中，

各“-”獨(dú)立地為連接肽或肽鍵；

L3為任選的信號(hào)肽序列；

S為自身抗原肽元件；

B為突變的β2M元件；

E為HLA-E重鏈元件。

在另一優(yōu)選例中，所述的自身抗原肽元件來源自選自下組的蛋白：

HLA-C信號(hào)肽、HLA-G信號(hào)肽、熱休克蛋白60、病毒蛋白UL40、HIV gag蛋白；較佳地為HLA-Cw*03信號(hào)肽。

在另一優(yōu)選例中，所述的自身抗原肽元件的序列如下所示