[發明專利]一種提高同時檢測10種赤霉素檢測穩定性的方法

有效

• 申請號: 201811230372.8
• 申請日: 2018-10-22
• 公開（公告）號: CN109239226B
• 公開（公告）日: 2019-05-24
• 發明（設計）人: 唐堂;陳宇;董學奎;石堅
• 申請（專利權）人: 嘉興邁維代謝生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 南京禹為知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32272
• 代理人: 王曉東

本發明公開了一種提高同時檢測10種赤霉素檢測穩定性的方法，其包括，10種赤霉素的提取：農作物葉片研磨，加入提取試劑，超聲、渦旋提取；樣品的純化；檢測分析：使用超高效液相色譜?串聯質譜儀進行測定，計算待測赤霉素的含量。本發明通過調整前處理中將含0.1％甲酸的70％乙睛作為提取試劑、選擇常溫超聲5min+渦旋5min的方法進行提取、選擇MAX和C18(CNW LC?C18 200mg)按照質量比1：(2～4)作為純化材料，并采用17個混標作為通用質控品監控儀器狀態、2?氯苯丙氨酸作為內標監控樣品采集情況，大大提高了本發明赤霉素的檢測穩定性，檢測重復好，誤差小。

技術領域

本發明屬于痕量植物激素的檢測技術領域，具體涉及一種提高同時檢測10種赤霉素檢測穩定性的方法。

背景技術

赤霉素(Gibberellins)是一類屬于雙萜類化合物的植物生長調節劑，在種子萌發、幼苗生長、開花結果等方面具有多種生理功能，已被廣泛使用在瓜果、蔬菜、糧食作物、園藝等生產過程中。

由于赤霉素在植物中的含量較低，對其進行定量要求較高的前處理和檢測方法，目前的檢測方法主要有熒光光譜法，酶聯免疫法，氣相色譜法等，目前的檢測方法有些前處理過于繁瑣，有些前處理靈敏度較低，有些前處理會造成對儀器的污染，檢測目前的檢測方法大多重復性差，檢測結果容易受到操作、儀器波動等影響，使得兩次重復檢測的定量結果差異較大。因此如何提供一種能夠降低對儀器的污染、簡化繁瑣的操作步驟帶來的誤差、增強檢測的穩定性、縮短操作時間，是本領域有待解決的技術問題。

發明內容

本部分的目的在于概述本發明的實施例的一些方面以及簡要介紹一些較佳實施例。在本部分以及本申請的說明書摘要和發明名稱中可能會做些簡化或省略以避免使本部分、說明書摘要和發明名稱的目的模糊，而這種簡化或省略不能用于限制本發明的范圍。

鑒于上述的技術缺陷，提出了本發明。

因此，作為本發明其中一個方面，本發明克服現有技術中存在的不足，提供一種提高同時檢測10種赤霉素檢測穩定性的方法。

為解決上述技術問題，本發明提供了如下技術方案：一種提高同時檢測10種赤霉素檢測穩定性的方法，其包括，

10種赤霉素的提取：農作物葉片研磨，加入提取試劑，超聲、渦旋提取；

樣品的純化：使用MAX和C18(CNW LC-C18200mg)進行除雜和富集；

檢測分析：使用超高效液相色譜-串聯質譜儀進行測定，計算待測赤霉素的含量。

作為本發明所述的提高同時檢測10種赤霉素檢測穩定性的方法的一種優選方案：所述10種赤霉素的提取，包括，將新鮮農作物葉片200mg經液氮研磨，然后加入含0.1％甲酸的70％乙睛的提取試劑1.5mL，進行常溫超聲5min，渦旋5min提取，提取結束后使用14000rpm轉速離心分離，取上清液1.0mL使用冷凍干燥離心機揮干溶劑，再使用70％乙睛100uL溶解樣本，再加入純水700uL稀釋至有機溶劑乙腈含量10％進行樣品的純化。

作為本發明所述的提高同時檢測10種赤霉素檢測穩定性的方法的一種優選方案：所述樣品的純化，包括使用MAX和C18(CNW LC-C18200mg)按照質量比1：(2～4)進行除雜和富集。

作為本發明所述的提高同時檢測10種赤霉素檢測穩定性的方法的一種優選方案：所述檢測分析，包括使用70％的乙睛作為洗脫劑，使用超高效液相色譜-串聯質譜儀進行測定，計算待測赤霉素的含量。

作為本發明所述的提高同時檢測10種赤霉素檢測穩定性的方法的一種優選方案：還包括，將2-氯苯丙氨酸代替溶劑作為內標，在檢測過程中，通過2-氯苯丙氨酸峰面積和保留時間反映實際樣本的采集情況；所述2-氯苯丙氨酸濃度為1μg/mL。