[發明專利]一種提高同時檢測10種赤霉素檢測穩定性的方法

有效

• 申請號: 201811230372.8
• 申請日: 2018-10-22
• 公開（公告）號: CN109239226B
• 公開（公告）日: 2019-05-24
• 發明（設計）人: 唐堂;陳宇;董學奎;石堅
• 申請（專利權）人: 嘉興邁維代謝生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 南京禹為知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32272
• 代理人: 王曉東

1.一種提高同時檢測10種赤霉素檢測穩定性的方法，其特征在于：包括，

10種赤霉素的提取：將新鮮農作物葉片200 mg經液氮研磨，加入含0.1 %甲酸的70%乙腈的提取試劑1.5 mL，進行常溫超聲5 min，渦旋5min提取，使用14000 rpm轉速離心分離，取上清液1.0 mL于冷凍干燥離心機揮干溶劑，再使用70%乙腈100 μL溶解樣本，加入純水稀釋至有機溶劑乙腈含量10%進行樣品的純化；

樣品的純化：使用MAX和C18柱按照質量比1：（2~4）進行除雜和富集；所述C18柱，其規格為CNW LC-C18 200mg；

檢測分析：使用超高效液相色譜-串聯質譜儀進行測定，計算待測赤霉素的含量；

質譜的離子對信息設置為：GA1-2：Q1：347、Q3：259、保留時間3.92、DP-60、CE-22；GA1-4：Q1：347、Q3：241、保留時間3.92、DP-60、CE-25；GA3-1：Q1：345、Q3：143、保留時間3.88、DP-60、CE-32；GA3-3：Q1：345、Q3：239、保留時間3.88、DP-60、CE-19；GA4-1：Q1：331、Q3：212.8、保留時間6.27、DP-60、CE-41；GA4-2：Q1：331、Q3：257、保留時間6.27、DP-60、CE-30；GA7-2：Q1：329.2、Q3：211、保留時間6.17、DP-70、CE-34；GA7-3：Q1：329.2、Q3：223、保留時間6.17、DP-60、CE-24；GA9-1：Q1：315.1、Q3：270.9、保留時間7.38、DP-80、CE-30；GA9-2：Q1：315.1、Q3：253.3、保留時間7.38、DP-80、CE-32；GA15-1：Q1：329.1、Q3：257.1、保留時間7.36、DP-75、CE-34；GA15-4：Q1：329.1、Q3：131、保留時間7.36、DP-75、CE-40；GA19-2：Q1：361.2、Q3：273.2、保留時間4.9、DP-80、CE-37；GA19-6：Q1：361.2、Q3：317.1、保留時間4.9、DP-80、CE-32；GA20-1：Q1：331.3、Q3：287、保留時間5.11、DP-60、CE-29；GA20-3：Q1：331.3、Q3：243、保留時間5.11、DP-58、CE-28；GA24-1：Q1：345.1、Q3：257.1、保留時間6.54、DP-73、CE-35；GA24-5：Q1：345.1、Q3：301.1、保留時間6.54、DP-60、CE-30；GA53-2：Q1：347.1、Q3：188.9、保留時間5.73、DP-70、CE-45；GA53-5：Q1：347.1、Q3：303.1、保留時間5.73、DP-70、CE-36；

還包括，使用4,4’-亞甲基雙（2-氯苯胺）、對茴香胺、L-酪氨酸甲酯、3-氯苯胺、2，4-二甲基喹啉、磺胺吡啶、阿特拉津、磺胺多辛、DL-亮氨酸、N-苯甲酰基-L-酪氨酸乙酯、6-苯基-2-硫脲嘧啶、N-(鄰甲苯酰)甘氨酸、2-甲基-5-硝基咪唑-1-乙醇、甘草次酸、黃烷酮、ε-己內酯、2-氨基吡啶的混合標樣作為通用質控品，每次檢測至少進兩針通用質控品，根據譜圖重疊情況分析檢測儀器的狀態；所述4,4’-亞甲基雙（2-氯苯胺）：對茴香胺：L-酪氨酸甲酯：3-氯苯胺：2，4-二甲基喹啉：磺胺吡啶：阿特拉津：磺胺多辛：DL-亮氨酸：N-苯甲酰基-L-酪氨酸乙酯：6-苯基-2-硫脲嘧啶：N-(鄰甲苯酰)甘氨酸：2-甲基-5-硝基咪唑-1-乙醇：甘草次酸：黃烷酮：ε-己內酯：2-氨基吡啶=1：0.5：0.5：2：1：0.4：0.1：0.1：0.2：0.5：0.5：1：1：0.1：0.5：2：0.2。

2.如權利要求1所述的提高同時檢測10種赤霉素檢測穩定性的方法，其特征在于：所述檢測分析，包括使用70%的乙腈作為洗脫劑，使用超高效液相色譜-串聯質譜儀進行測定，計算待測赤霉素的含量。

3.如權利要求1或2所述的提高同時檢測10種赤霉素檢測穩定性的方法，其特征在于：還包括，將2-氯苯丙氨酸代替溶劑作為內標，在檢測過程中，通過2-氯苯丙氨酸峰面積和保留時間反映實際樣本的采集情況；所述2-氯苯丙氨酸濃度為1 μg/mL。

4.如權利要求1所述的提高同時檢測10種赤霉素檢測穩定性的方法，其特征在于：所述4,4’-亞甲基雙（2-氯苯胺）的濃度為1μg/mL、對茴香胺的濃度為0.5μg/mL、L-酪氨酸甲酯的濃度為0.5μg/mL、3-氯苯胺的濃度為2μg/mL、2，4-二甲基喹啉的濃度為1μg/mL、磺胺吡啶的濃度為0.4μg/mL、阿特拉津的濃度為0.1μg/mL、磺胺多辛的濃度為0.1μg/mL、DL-亮氨酸的濃度為0.2μg/mL、N-苯甲酰基-L-酪氨酸乙酯的濃度為0.5μg/mL、6-苯基-2-硫脲嘧啶的濃度為0.5μg/mL、N-(鄰甲苯酰)甘氨酸的濃度為1μg/mL、2-甲基-5-硝基咪唑-1-乙醇的濃度為1μg/mL、甘草次酸的濃度為0.1μg/mL、黃烷酮的濃度為0.5μg/mL、ε-己內酯的濃度為2μg/mL、2-氨基吡啶的濃度為0.2μg/mL。