[發明專利]一種同時快速檢測UGT1A1*6型與UGT1A1*28型基因多態性的試劑盒及方法

在審

• 申請號: 201811228568.3
• 申請日: 2018-10-22
• 公開（公告）號: CN109371127A
• 公開（公告）日: 2019-02-22
• 發明（設計）人: 何順清;王家亮;楊欽予
• 申請（專利權）人: 江蘇美因康生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 常州佰業騰飛專利代理事務所(普通合伙) 32231
• 代理人: 張福敏

本發明公開了一種同時快速檢測UGT1A1*6型與UGT1A1*28型基因多態性的試劑盒及方法，屬于基因檢測技術領域，用于檢測與腫瘤化療藥物伊立替康不良反應相關基因UGT1A1*6型與*UGT1A1*28型基因多態性，包括用于人全血樣本快速處理的樣本處理試劑、經預混單人份分裝的基因檢測試劑、陽性對照品和陰性對照品。本發明在保證檢出特異性和靈敏的基礎之上，實現便捷、快速、高效地檢測，減少檢測操作步驟、縮減檢測反應時間的同時減低了生產成本和檢測成本，有利于臨床檢測分析應用。

技術領域

本發明涉及一種基因多態性檢測試劑盒及方法，特別是涉及一種同時快速檢測UGT1A1*6型與UGT1A1*28型基因多態性的試劑盒及方法，屬于基因檢測技術領域。

背景技術

尿苷二磷酸葡萄糖醛酰轉移酶(UGTs)是一大類能催化葡萄糖醛酸與親核底物結合的膜結合酶，主要存在于肝臟和肝外組織內質網，UGT分為兩個家族，已經發現有17種人類的基因編碼不同序列的UGT，酶的表達具有明顯的組織特異性，主要在肝臟中表達，其他組織包括腦、腎、胃腸道等，UDP-葡萄糖醛基轉移酶1A1(簡稱UGT1A1)，參與多種物質的葡萄糖醛基化，這一結合反應的目的在于增加底物的水溶性，增加從膽汁和尿液中的排泄量，達到物質代謝、解毒的目的，UGT1A1基因有30多個等位基因，其中一些SNP可影響酶的功能和分步。

伊立替康是(Irenotecan，CPT-11)是喜樹堿半合成衍生物，在體內經羥酸酯酶水解成7-乙基-10-羥基喜樹堿(SN-38)，SN-38是DNA拓撲異構酶I的抑制劑，作用于細胞周期S期，抑制、干擾DNA修復和轉錄，伊立替康自用于臨床后，一直是治療直結腸癌最有效的化療藥物之一，但在臨床使用中，也發現伊立替康會導致嚴重的血液毒性和消化道毒性，表現為腹瀉和中性粒細胞減少，發生率可達30％和50％，嚴重時會導致死亡。

臨床研究表明UGT1A1*6型和*UGT1A1*28型與伊立替康引發的副反應有著強相關性，且種族差異，在高加索患者中，UGT1A1*28純和子(TA7/7)和雜合子(TA6/7)顯著增加患者發生嚴重粒細胞減少和腹瀉的風險，而在亞洲患者中，UGT1A1*6型突變顯著增加患者發生3-4級中性粒細胞減少、血小板減少及腹瀉的風險。

UGT1A1*6型的多態性表現為c.211G>A。亞洲人群中，A/G和A/A攜帶者在伊立替康治療中，發生3-4級中性粒細胞減少和非血液學毒性的風險顯著提高，UGT1A1*6型突變在亞洲人群中的攜帶比例高達13-23％，UGT1A1*28多態性是指UGT1A1基因啟動子區TA堿基重復序列的多態性，正常野生型為6個TA重復序列(TA6)，而*UGT1A1*28型則含7個TA重復序列(TA7)，根據TA重復序列的多少，可以分為*1/*1、*1/*28和*28/*28。UGT1A1*28純合突變型在非洲人和高加索人中頻率較高達到12-27％和5-15％，在亞洲人中，僅為1.2-5％。

發明內容

本發明的主要目的是為了提供一種同時快速檢測UGT1A1*6型與UGT1A1*28型基因多態性的試劑盒及方法，解決現有技術檢測UGT1A1*6型與*UGT1A1*28型基因多態性時對樣本處理要求高、檢測周期長、操作復雜、成本高和特異性不強等不足。

本發明的目的可以通過采用如下技術方案達到：

一種同時快速檢測UGT1A1*6型與UGT1A1*28型基因多態性的試劑盒，用于檢測與腫瘤化療藥物伊立替康不良反應相關基因UGT1A1*6型與*UGT1A1*28型基因多態性，包括樣本處理試劑、基因檢測試劑、陽性對照品和陰性對照品。

進一步的，基因檢測試劑采用PCR8聯管單人份預混分裝，包括：

檢測UGT1A1*6型引物對：SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.2；

檢測UGT1A1*6(211G＞A)型特異性探針SEQ ID NO.3-SEQ ID NO.4；