[發明專利]一種快速核酸提取方法

在審

• 申請號: 201811227897.6
• 申請日: 2018-10-22
• 公開（公告）號: CN109207475A
• 公開（公告）日: 2019-01-15
• 發明（設計）人: 李博安;張睿
• 申請（專利權）人: 博迪泰（廈門）生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京權智天下知識產權代理事務所(普通合伙) 11638
• 代理人: 李海燕

本發明公開了一種快速核酸提取方法，該方法包括以下步驟：步驟一、裂解核酸樣品：將含有核酸的樣品加入裂解液中，形成核酸裂解液；步驟二、吸附核酸：將載體加入所述核酸裂解液中，得到吸附核酸的載體；步驟三、除去雜質：將吸附了核酸的載體在漂洗液中漂洗，除去除核酸外的雜質；步驟四、擴增反應：將漂洗后的吸附有核酸的載體直接加入核酸擴增體系中進行擴增反應；所述載體為纖維素濾紙；本發明提供一種簡單、快速、基于纖維素濾紙為載體中提取核酸，適用于聚合酶鏈反應擴增和重組酶聚合酶恒溫擴增等核酸擴增技術，適用在室溫運行，適用于各種來源的生物樣品，可以將載有核酸的纖維素濾紙直接加入核酸擴增體系中進行擴增反應，整個過程耗時少。

技術領域

本發明涉及核酸提取領域，特別涉及一種快速核酸提取方法。

背景技術

對于利用核酸擴增技術進行分子診斷的主要挑戰是擴增前含核酸材料的預處理以及繁雜的核酸提取步驟。目前廣泛使用的基于二氧化硅和基于磁珠的技術存在著諸多缺陷，包括效率過低(≤10％)；還有需要針對特定靶標類型進行優化，造成一種樣品類型的提取過程通常與其它樣品類型不相容；而利用酚氯仿的方法雖然回收率高，但是由于提取液組分的毒性高而限制了其使用范圍；基于去污劑的方法溶解過程簡單，但需要進行高溫變性(95℃)處理，另外由于反轉錄酶不是熱穩定的，因此不適用于單步驟RT-PCR。重要的是，現行的所有方法均需要進行反復的離心，提取步驟繁雜、耗費時間長、需要特定的設備。

本申請中我們描述了一種避免此提取過程復雜性的方法，在簡單、快速、基于纖維素濾紙的系統中提取足量的核酸，適用于PCR、RPA等核酸擴增技術的使用，所述系統在室溫運行，適用于各種來源的生物樣品，并且可以將載有核酸的纖維素濾紙直接加入核酸擴增體系中進行擴增反應，整個過程小于1分鐘。

發明內容

發明的目的在于提供一種快速核酸提取方法，解決了提取過程復雜、耗費時間長以及需要特定設備的問題。

本發明是這樣實現的，一種快速核酸提取方法，該方法包括以下步驟：

步驟一、裂解核酸樣品：將含有核酸的樣品加入裂解液中，形成核酸裂解液；

步驟二、吸附核酸：將載體加入所述核酸裂解液中，得到吸附核酸的載體；

步驟三、除去雜質：將吸附了核酸的載體在漂洗液中漂洗，除去除核酸外的雜質；

步驟四、擴增反應：將漂洗后的吸附有核酸的載體直接加入核酸擴增體系中進行擴增反應；

所述載體為纖維素濾紙。

本發明的進一步技術方案是：所述纖維素濾紙的形狀為圓形或/和多邊形，所述纖維素濾紙的面積大小不超過9mm²。其作為核酸吸附載體未經過任何處理與修飾，這與其它已經公布的發明中通常將核酸吸附載體經過各種不同的處理與修飾是截然不同的且過大的面積反而會大幅降低核酸釋放效率，從而影響后續核酸擴增效果。

本發明的進一步技術方案是：所述裂解液包括鹽酸胍、異硫氰酸胍、Tris、Tween20、NaCl、TritonX-100、EDTA、PVP、檸檬酸鈉、月桂肌酸鈉以及β巰基乙醇中的至少3種，其中Tris的PH值為8.0。保證DNA、RNA釋放到溶液中。

本發明的進一步技術方案是：所述裂解液包括1.5M鹽酸胍、4M異硫氰酸胍、50mMTris、1％Tween20、100mM-150mM NaCl、0.5％TritonX-100、5mM EDTA、2％PVP、25mM檸檬酸鈉、0.5％月桂肌酸鈉以及0.1mMβ巰基乙醇中的至少3種。

本發明的進一步技術方案是：所述裂解液分為DNA裂解液和RNA裂解液。

本發明的進一步技術方案是：所述DNA裂解液為鹽酸胍、Tris、Tween20、NaCl、TritonX-100、EDTA以及PVP中的至少3種，其中Tris的PH值為8.0。