[發明專利]抗體的純化方法、抗體和應用

在審

• 申請號: 201811226606.1
• 申請日: 2018-10-19
• 公開（公告）號: CN111072773A
• 公開（公告）日: 2020-04-28
• 發明（設計）人: 季紅斌;鄧勇民;鐘冬梅;孟媛;柏艷輝;范凌云
• 申請（專利權）人: 菲鵬生物股份有限公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C07K1/22;C07K1/16;C07K1/18;C07K1/20
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 賈顏維

本發明提供了一種抗體的純化方法、抗體和應用，涉及蛋白純化的技術領域。該純化方法包括：提供含有抗體粗品的細胞發酵液；提供用于層析的緩沖液；然后使用AKTA Avant 150對抗體粗品進行組合層析；其中組合層析依次包括(a)親和層析以捕獲抗體；(b)凝膠過濾層析置換Buffer以脫鹽；(c)再次層析分離抗體以對抗體進行精純處理。該抗體純化方法具有操作簡單、純化效率高、樣品損失少和純化出的抗體純度高的優點。

技術領域

本發明涉及蛋白純化技術領域，尤其是涉及一種抗體的純化方法、抗體和應用。

背景技術

1986年首次治療性單克隆抗體(單抗)獲得批準后，人們對治療性單抗的需求顯著增加。截止2015年11月，53種新型治療性單克隆抗體進入3期臨床研究，比2009年增加了104％，其中六個已于2016年在歐盟或美國首次獲得批準。目前每年約有4種新的治療性單抗產品的獲得上市批準，按照這樣的增加速度，到2020年市場上預計將會有70種單抗，全球銷售額將達到1250億美元。

治療單克隆抗體的純化制備，多數是基于Protein A的親和層析作為第一步進行純化，但是通常情況下，一步ProteinA親和層析的純度等方面達不到治療抗體的要求(一般純度要求95％)，另外由于是CHO細胞系作為宿主表達抗體時，細胞培養上清中，不僅含有目標抗體，而且還有宿主蛋白(HCP)，宿主DNA(HCD)等雜質，單純一步Protein A層析去除不掉全部的雜質，需要額外增一步或者幾步層析過程來滿足要求。

治療性單克隆抗體最常見的純化工藝的層析過程是Protein A(親和層析，AC)，脫鹽(BEX)，陽離子交換(CEX)，脫鹽(BEX)，陰離子交換(AEX)。脫鹽過程可以使用脫鹽柱或者超濾脫鹽。目前，幾乎大部分純化工作人員都是采用的手動一步層析方法，每步層析都需要單獨的上樣，洗脫，處理樣品，然后進行下一步層析操作，極少同時用到手動兩步層析方法進行純化。手動層析不僅會造成樣品的損失，而且人工耗時多，設備投入量較大。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的第一目的在于提供一種抗體的純化方法，具有操作簡單、純化效率高、樣品損失少和純化出的抗體純度高的優點。

本發明的第二目的在于提供一種使用上述抗體的純化方法純化得到的抗體。

本發明的第三目的在于提供一種上述抗體的純化方法在制備抗體藥物中的應用。

為解決上述技術問題，本發明特采用如下技術方案：

本發明提供了一種抗體的純化方法，包括：提供含有抗體粗品的細胞發酵液；提供用于層析的緩沖液；然后使用AKTA Avant 150對抗體粗品進行組合層析；所述組合層析依次包括如下步驟:

(a)親和層析以捕獲抗體；

(b)凝膠過濾層析置換Buffer以脫鹽；

(c)再次層析分離抗體以對抗體進行精純處理；

其中，AKTA Avant 150中管路與層析柱的連接方式為：設備的Out1出口連接到Loop環的上樣口，將用于步驟(a)的親和層析柱連在柱位Position 3；將用于步驟(b)的凝膠過濾層析柱替換掉Loop環；將用于步驟(c)的層析柱連接在柱位Position 1。

優選地，用于步驟(a)的親和層析柱中的填料包括Protein A、Protein G或Protein L中的至少一種；優選為Protein A。

優選地，步驟(c)中再次層析分離抗體的方式包括：離子交換層析、親和層析、羥基磷灰石層析或疏水相互作用層析。

優選地，步驟(c)中再次層析分離抗體的方式為離子交換層析，優選為陽離子交換層析。