[發明專利]抗體的純化方法、抗體和應用

在審

• 申請號: 201811226606.1
• 申請日: 2018-10-19
• 公開（公告）號: CN111072773A
• 公開（公告）日: 2020-04-28
• 發明（設計）人: 季紅斌;鄧勇民;鐘冬梅;孟媛;柏艷輝;范凌云
• 申請（專利權）人: 菲鵬生物股份有限公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C07K1/22;C07K1/16;C07K1/18;C07K1/20
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 賈顏維

1.一種抗體的純化方法，其特征在于，包括：提供含有抗體粗品的細胞發酵液；提供用于層析的緩沖液；然后使用AKTA Avant 150對抗體粗品進行組合層析；所述組合層析依次包括如下步驟:

(a)親和層析以捕獲抗體；

(b)凝膠過濾層析置換Buffer以脫鹽；

(c)再次層析分離抗體以對抗體進行精純處理；

其中，AKTA Avant 150中管路與層析柱的連接方式為：設備的Out1出口連接到Loop環的上樣口，將用于步驟(a)的親和層析柱連在柱位Position3；將用于步驟(b)的凝膠過濾層析柱替換掉Loop環；將用于步驟(c)的層析柱連接在柱位Position 1。

2.根據權利要求1所述的抗體的純化方法，其特征在于，用于步驟(a)的親和層析柱中的填料包括Protein A、Protein G或Protein L中的至少一種；優選為Protein A。

3.根據權利要求1所述的抗體的純化方法，其特征在于，步驟(c)中再次層析分離抗體的方式包括：離子交換層析、親和層析、羥基磷灰石層析或疏水相互作用層析；

優選地，步驟(c)中再次層析分離抗體的方式為離子交換層析，優選為陽離子交換層析；

優選地，步驟(c)中再次層析分離抗體的方式為疏水相互作用層析。

4.根據權利要求1所述的抗體的純化方法，其特征在于，所述純化方法還包括將AKTAAvant 150的樣品泵的上樣入口設置為變量，以用于依次純化多個抗體樣品。

5.根據權利要求1所述的抗體的純化方法，其特征在于，所述組合層析的流路包括：

(x1)親和上樣：抗體粗品經Sample pump從Injection valve注入管路，流經親和層析柱與層析柱中填料特異性結合，然后濾液依次經UV monitor、Conductivity monitor和pHvalve流至Fraction collection，進行收集流傳液；

(x2)親和Wash雜質：Buffer A1經System pump A從Injection valve注入管路，流經親和層析柱洗脫雜質，然后濾液依次經UV monitor、Conductivity monitor和pH valve流至Waste，流出后至廢棄液中；

(x3)親和洗脫抗體和凝膠過濾層析上樣：Buffer B1經System pump B從Injectionvalve注入管路后流經親和層析柱，以用于親和洗脫被親和層析柱捕獲的抗體，然后帶有抗體樣品的濾液依次經UV monitor、Conductivity monitor和pH valve流至Outlet valve，峰收集后不經排出重新流回Injection valve并注入凝膠過濾層析柱；

(x4)層析上樣：Buffer A2經System pump A從Injection valve注入管路，將抗體樣品從凝膠過濾層析柱洗脫的同時上樣至步驟(c)使用的層析柱中，濾液依次經UV monitor、Conductivity monitor和pH valve流至Outlet valve，流出后收集濾液；

(x5)層析洗脫：將Buffer A2經System pump A從Injection valve注入管路，同時Buffer B2經System pump B從Injection valve注入管路后流經層析柱進行梯度洗脫，以洗脫與層析柱結合的抗體，然后濾液依次經UV monitor、Conductivity monitor和pHvalve后流至Fraction Collection，流出后收集濾液得到純化后的抗體。