[發明專利]一種用于檢測農副產品中棉酚含量的超高效液相色譜串聯質譜檢測方法

在審

• 申請號: 201811226227.2
• 申請日: 2018-10-22
• 公開（公告）號: CN109254095A
• 公開（公告）日: 2019-01-22
• 發明（設計）人: 李凌慧;魏月;馬晶軍;楊舒妍
• 申請（專利權）人: 河北農業大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/08
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本發明公開了一種農副產品中棉酚的懸浮固化分散液相微萃取?超高效液相色譜串聯質譜檢測方法。本發明采用優化后的懸浮固化分散液相微萃取作為前處理方法提取農副產品中的棉酚，取得較高的加標回收率，然后采用超高效液相色譜串聯質譜技術檢測棉酚含量。方法簡單、綠色、高效，可定性定量，可為食品安全監測提供科學的技術手段。

技術領域

本發明涉及食品檢測領域，具體涉及一種超高效液相色譜串聯質譜檢測方法，用于檢測農副產品中棉酚的含量。

背景技術

棉酚，相對分子質量為518.54，是一種不溶于水，易溶于甲醇、丙酮、乙腈等有機溶劑中的天然萘系衍生物，廣泛存在于棉籽中[1]。因其具有兩個醛基六個酚羥基而具有較高的活性^[2]。自然界中，棉酚存在兩種形式^[3]，一種是游離棉酚，此種形式具有毒性，大量存在于壓榨提取棉籽油的副產品中，該種副產品以棉籽粕為主，其中富含豐富的蛋白質，是質優廉價的動物飼料蛋白質的主要來源；另一種是當游離棉酚與氨基酸、小肽等分子結合后形成的不具毒性的結合棉酚，也是棉酚在醫學、藥學、生物燃料等領域發揮重要作用的物質^[4]。棉酚衍生物不僅可以作為抗腫瘤藥物，還具有改善糖尿病、抗生育、抗氧化活性、抗腫瘤、抗癌等醫用價值^[5-9]。畜禽飼料中添加脫除棉酚不完全或未經脫棉酚的棉籽粕，導致棉酚以游離棉酚的形式存在于畜禽飼料中，棉籽粕作為質優價廉的動物飼料蛋白源之一^[10-11]，被畜禽大量攝入時，會使畜禽出現食欲減退、呼吸困難、受精率下降等癥狀^[12]，再通過食物鏈的作用，蓄積在肉、蛋、奶等食物中，間接威脅人類健康。因此，為保證我國農副產品的食用安全，建立快速、高效、準確的檢測農副產品中棉酚含量的方法至關重要。

近年來，研究學者大多檢測棉籽、棉籽油和動物肝臟等農副產品中的棉酚，通過與國外研究對比發現中國學者檢測農副產品中棉酚的研究較多。實驗室內提取棉酚的主要方法有間苯三酚法^[13]、有機溶劑浸提法^[14]、酸性溶劑萃取法^[15]以及超聲提取法^[16]等，這些前處理方法有機溶劑用量大，方法檢出限較高，而且在提取過程中，因棉酚易見光分解，導致痕量棉酚的檢測方法受到限制。因此，試驗擬采用懸浮固化分散液相微萃取的提取方法聯合超高效液相色譜串聯質譜技術（UPLC-MS/MS），實現對農副產品中痕量棉酚準確、高效地測定。

發明內容

本發明克服了上述現有技術的不足，提供了一種農副產品中棉酚的懸浮固化分散液相微萃取-超高效液相色譜串聯質譜檢測方法。本發明采用優化后的懸浮固化分散液相微萃取作為前處理方法提取農副產品中的棉酚，取得較高的加標回收率，然后采用超高效液相色譜串聯質譜技術檢測棉酚含量。方法簡單、綠色、高效，可定性定量，可為食品安全監測提供科學的技術手段。

本發明的的技術方案為：其特征是，包括以下步驟：

1）樣品前處理

準確稱取樣品后，加入水、分散劑（100）低溫超聲，再加入萃取劑（100）低溫超聲提取、離心、冰水浴取出固化液滴后乙腈溶解定容。

具體步驟如下：準確稱取棉籽油樣品1.00 g（準確稱取蛋清蛋黃攪拌均勻的雞蛋混合液0.20 g，準確稱取牛奶1.00 g）于50 mL具塞刻度離心管中，加入100 μL乙腈后加純凈水至5 mL刻度處，劇烈震蕩2 min，低溫超聲5 min，取上清液至10 mL離心管中，再加入100 μL正十二烷醇劇烈震蕩2 min，低溫超聲提取30 min后離心5 min（4000 r/min），冰水浴5 min取出固化液滴，乙腈溶解后用0.22 μm有機微孔濾膜過濾，乙腈定容1 mL。

2）定性定量分析

得到的待測液采用超高效液相色譜串聯質譜技術進行定性定量分析。

所述超高效液相色譜儀器參數條件如下：