[發明專利]一種磁珠法口腔拭子基因組DNA提取試劑盒

在審

• 申請號: 201811225692.4
• 申請日: 2018-10-21
• 公開（公告）號: CN109234271A
• 公開（公告）日: 2019-01-18
• 發明（設計）人: 金安娜;高伙妮;包文靜;龔偉
• 申請（專利權）人: 上海睿璟生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種磁珠法口腔拭子基因組DNA提取試劑盒，屬于基因組DNA提取領域，所述磁珠法口腔拭子基因組DNA提取試劑盒包括：裂解液以及磁珠，裂解液組成成分為：20?100mmol/L的鹽酸胍、10?50mmol/L的PH為8.0的Tris緩沖溶液、50?250mmol/L的KCl溶液、10?100mmol/L的PH為8.0的EDTA螯合劑以及體積含量為0.1％?1％SDS親水基表面活性劑，所述的磁珠法口腔拭子基因組DNA提取試劑盒解決了目前技術中采用酚氯仿、柱提法等方法從口腔拭子中提取DNA過程存在酚氯仿污染、DNA得率低、純度差的問題，所述磁珠法口腔拭子基因組DNA提取試劑盒提取口腔拭子樣本中的基因組DNA，片段完整度高，產物濃度和純度高，提取的DNA可用于PCR擴增以及熒光定量PCR等實驗，值得推廣。

技術領域

本發明涉及基因組DNA提取領域，具體是一種磁珠法口腔拭子基因組DNA提取試劑盒。

背景技術

人口腔黏膜由多層細胞組成，具有代謝快、易脫落、DNA完整的特點，因此，運用口腔拭子采集口口腔脫落細胞DNA過程簡單、無痛、無創。該方法適用于不同年齡段人群的DNA樣本采集，也適用不便采血的人群采集DNA。

傳統方法中多采用酚氯仿、Chelex-100、柱提法等方法從口腔拭子中提取DNA，該過程存在酚氯仿污染、DNA得率低、純度差或者操作繁瑣，用時長等缺點，嚴重影響了醫護人員了解患者病況的效率。

針對上述背景技術中提出的問題，本發明旨在提供一種磁珠法口腔拭子基因組DNA提取試劑盒。

發明內容

本發明的目的在于提供一種磁珠法口腔拭子基因組DNA提取試劑盒，以解決上述背景技術中提出的目前傳統方法中采用酚氯仿、Chelex-100、柱提法等方法從口腔拭子中提取DNA過程存在酚氯仿污染、DNA得率低、純度差或者操作繁瑣，用時長的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種磁珠法口腔拭子基因組DNA提取試劑盒，其包括：高效的裂解液以及獨特的結合磁珠，其中：裂解液組成成分為：20-100mmol/L的鹽酸胍、10-50mmol/L的PH為8.0的Tris緩沖溶液、50-250mmol/L的KCl溶液、10-100mmol/L的PH為8.0的EDTA螯合劑以及體積含量為0.1％-1％SDS親水基表面活性劑。

所述磁珠法口腔拭子基因組DNA提取試劑盒使用方法包括以下步驟：口腔拭子取樣品、裂解液洗脫拭子上細胞并將含細胞液體轉移至離心管、蛋白酶K消化、磁珠純化、75％乙醇溶液洗滌以及含Nuclease free water低鹽緩沖液洗脫。

作為本發明進一步的方案：所述口腔拭子取樣品實施方式為：將在口腔內擦拭過的拭子或者棉簽轉置于1.5mL的離心管中，將拭子剪下或者使其脫落；所述裂解液洗脫拭子上細胞并將含細胞液體轉移至離心管實施方式為：往裝有口腔拭子樣品中的離心管中加入300uL裂解液，震蕩混勻離心，將液體轉移至新的1.5mL離心管中得混合液一。

作為本發明再進一步的方案：所述蛋白酶K消化實施方式為：往混合液一中加入10uL蛋白酶K，吹打混勻，在56℃，800rpm的轉速的條件下孵育30min得混合液二；所述磁珠純化實施方式為：混合液二室溫放置5min后，12000rpm離心2min，將200uL上清轉移至含100uL結合磁珠的1.5mL離心管中，渦旋混勻，室溫靜置孵育5min，短離，將離心管置于磁力架上至溶液澄清。