[發明專利]一種磁珠法口腔拭子基因組DNA提取試劑盒

在審

• 申請號: 201811225692.4
• 申請日: 2018-10-21
• 公開（公告）號: CN109234271A
• 公開（公告）日: 2019-01-18
• 發明（設計）人: 金安娜;高伙妮;包文靜;龔偉
• 申請（專利權）人: 上海睿璟生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種磁珠法口腔拭子基因組DNA提取試劑盒，其包括：裂解液以及磁珠，其特征在于：所述裂解液組成成分為：20-100mmol/L的鹽酸胍、10-50mmol/L的PH為8.0的Tris緩沖溶液、50-250mmol/L的KCl溶液、10-100mmol/L的PH為8.0的EDTA螯合劑以及體積含量為0.1％-1％SDS親水基表面活性劑。

2.根據權利要求1所述的一種磁珠法口腔拭子基因組DNA提取試劑盒，其特征在于：所述裂解液組成成分為：30-90mmol/L的鹽酸胍、20-40mmol/L的PH為8.0的Tris緩沖溶液、60-240mmol/L的KCl溶液、20-90mmol/L的PH為8.0的EDTA螯合劑以及體積含量為0.2％-0.9％SDS親水基表面活性劑。

3.一種如權利要求1-2任一所述的磁珠法口腔拭子基因組DNA提取試劑盒的使用方法，其特征在于包括以下步驟：口腔拭子取樣品、裂解液洗脫拭子上細胞并將含細胞液體轉移至離心管、蛋白酶K消化、磁珠純化、75％乙醇溶液洗滌以及含Nuclease free water的低鹽緩沖液洗脫。

4.根據權利要求3所述的一種磁珠法口腔拭子基因組DNA提取試劑盒的使用方法，其特征在于：所述口腔拭子取樣品實施方式為：將在口腔內擦拭過的拭子或者棉簽轉置于1.5mL的離心管中，將拭子剪下或者使其脫落；所述裂解液洗脫拭子上細胞并將含細胞液體轉移至離心管實施方式為：往裝有口腔拭子樣品中的離心管中加入300uL裂解液，震蕩混勻離心，將液體轉移至新的1.5mL離心管中得混合液一。

5.根據權利要求4所述的一種磁珠法口腔拭子基因組DNA提取試劑盒的使用方法，其特征在于：所述蛋白酶K消化實施方式為：往混合液一中加入10uL蛋白酶K，吹打混勻，在56℃，800rpm的轉速的條件下孵育30min得混合液二；所述磁珠純化實施方式為：混合液二室溫放置5min后，12000rpm離心轉速條件下離心2min，將200uL上清液轉移至含100uL結合磁珠的1.5mL離心管中，渦旋混勻，室溫靜置孵育5min，短離，將離心管置于磁力架上至溶液澄清。

6.根據權利要求5所述的一種磁珠法口腔拭子基因組DNA提取試劑盒的使用方法，其特征在于：所述75％乙醇溶液洗滌實施方式為：移除上清液，向離心管中加入500uL 75％乙醇溶液，劇烈Vortex，磁力架上30s，重復該步驟一次，即75％乙醇溶液洗滌步驟實施兩次，短離，使用移液器移除底部殘留乙醇溶液，室溫靜置2-5min，至磁珠不反光。

7.根據權利要求6所述的一種磁珠法口腔拭子基因組DNA提取試劑盒的使用方法，其特征在于：所述含Nuclease free water低鹽緩沖液洗脫實施方式為：加入20-50uL的含Nuclease free water低鹽緩沖液，把離心管從磁力架取下，重懸磁珠，室溫靜置5min，將離心管置于磁力架上2min，用移液器吸取上清液，轉移到新的1.5ml離心管中。