[發明專利]微孔膜截留集聚生化檢測裝置及其檢測方法

在審

• 申請號: 201811224877.3
• 申請日: 2018-10-19
• 公開（公告）號: CN111077325A
• 公開（公告）日: 2020-04-28
• 發明（設計）人: 馬校衛;魏鵬海;周中人
• 申請（專利權）人: 上海快靈生物科技有限公司;上海快靈生物工程有限公司
• 主分類號: G01N35/00
• 分類號: G01N35/00
• 代理公司: 上海華工專利事務所(普通合伙) 31104
• 代理人: 趙孟琴;繆利明

本發明公開了一種微孔膜截留集聚微球的生化檢測裝置，包括溶液反應區，所述溶液反應區的一個端面上設置了一個溶液流出口，所述溶液流出口的表面設置有孔徑基本均勻的微孔膜；溶液反應區中設置有包被微球、固定于包被微球表面的捕獲試劑、以及標記試劑；捕獲試劑及標記試劑具有互為直接或間接配位體關系的物質；含待測物質的樣品溶液加入后捕獲試劑、標記試劑和待測樣品在溶液中發生結合反應，在包被微球表面形成配位體反應復合物,在溶液穿越微孔膜流出的過程中，游離標記試劑穿越微孔膜流出了，承載了配位體反應復合物的包被微球被微孔膜截留在表面，形成聚集濃縮效果。

技術領域

本發明涉及生化免疫檢測技術領域，具體地說，是關于一種微孔膜截留集聚生化檢測裝置及其檢測方法。

背景技術

免疫分析技術是其利用抗原與抗體之間高特異性產生的識別和結合反應實現生物分子的檢測，具備靈敏度高、特異性強、適用面廣、所需設備簡單、線性范圍較寬等優點，已成為當今最具競爭力和挑戰性的分析測試技術之一，在生命科學、臨床醫學以及環境、食品、藥物等領域得到廣泛應用。免疫標記分析技術主要包括：放射物標記、酶標記、發光標記、熒光標記等方法。用放射物標記抗原或抗體發展的放射免疫分析(radio immunoassay,RIA)是美國科學Yalow和Berson于1959年創立的一種微量分析法,它是將具有高靈敏度的放射性核素示蹤技術和特異性免疫化學技術相結合而建立的新方法。該技術利用核素標記物的放大效應，改善了待測物的檢測下限，同時以抗體或抗原作為結合試劑，大大提高了檢測方法的特異性。

以熒光標記的熒光免疫分析(fluorescein immunoassay,FIA)是由Conn等首創于20世紀40年代的一種標記免疫學技術，其所用標記物是熒光素和熒光染料，是將抗原或抗體標記以熒光物質與相應抗原或抗體結合，在熒光顯微鏡或紫外線照射下，檢測熒光強度和熒光現象的一種檢測方法。熒光標記免疫法靈敏度高，但熒光素常會產生生物學毒性，導致抗體或抗原的靈敏度和選擇性下降。

酶標記分析技術是繼免疫熒光抗體技術和放射免疫分析之后發展起來的一大新型的血清學技術。1966年，Nakane等和Avrameas等分別報道用酶代替熒光素標記抗體，建立了酶標抗體技術(enzyme-labelled antibody technique)，用于生物組織中抗原的定位和鑒定。1971年，Engvall Van Weemen等報道了酶聯免疫吸附試驗，從而建立了酶標抗體的定量檢測技術。20世紀80年代，基于酶標記抗體檢測和鑒定蛋白質分子的免疫轉印技術問世。目前，免疫酶標記技術已成為免疫診斷、檢測和分子生物學研究中應用最廣泛的免疫學方法之一。

發光標記分析是20世紀80年代末,國外開始用化學發光試劑來標記抗原或抗體，從而建立了發光免疫分析技術。狹義的發光免疫分析(LIA)主要是指化學發光免疫分析(CLIA)。另外，還有酶放大化學發光免疫分析和電化學發光免疫分析(ECLIA)。CLIA是Sohrocler和Halman在20世紀70年代末期建立的，該方法兼有發光分析的高靈敏度和免疫反應的特異性。其基本原理同酶標記分析法，是用化學發光反應的試劑(可以是發光劑或催化劑等)標記抗原或抗體，標記后的抗原和抗體與待測物經過一系列的免疫反應和理化步驟(如離心分離、洗滌等),最后以測定發光強度形式測定。

目前免疫分析技術主要采用以微孔板為實驗平臺的非均相分析模式，需要包埋、洗脫、分離等多步操作，分析過程繁瑣，分析時間長，不能滿足快速檢測和診斷的要求。生物反應中通過微孔膜進行不同分子量的蛋白及微粒微球的穿越，是一個很常用的技術手段，尤其是在蛋白純化中常用的離心濾管。但離心濾管一般是溶液手動加入，離心后添加復溶液將穿越的蛋白溶解回收。

免疫側向層析技術是20世紀末發展起來的結合免疫技術和色譜層析技術的一種分析方法，該方法具有特異性、操作簡單、快速等特點，廣泛應用于臨床診斷、環境監測、食品安全等重要領域。傳統免疫層析技術以膠體金為標記物，通過條帶顯色對目標物定性檢測或半定量分析。熒光免疫層析技術作為一項新型免疫檢測技術，既有傳統膠體金試紙條的現場快速檢測優點，又發展了熒光技術的高靈敏度特點。